赤潮生物的分子探針檢測方法及其應(yīng)用研究.pdf

1、有害赤潮正成為越來越嚴(yán)重的全球性海洋災(zāi)害。本文針對目前赤潮藻分類鑒定和快速檢測方法中的不足,從最基本的檢測方法與技術(shù)的建立和優(yōu)化入手,對赤潮生物分類、鑒定中的形態(tài)學(xué)、化學(xué)分類學(xué)和分子分類學(xué)問題以及赤潮生物原位增長率測定等基礎(chǔ)性科學(xué)問題開展了研究,同時也在寡核苷酸、肽核酸和細胞凝集素3類探針的設(shè)計、篩選、驗證、開發(fā)等方面開展了系列研究,建立和發(fā)展了上述3類探針的檢測應(yīng)用技術(shù),并對這些探針進行了實驗室驗證和在現(xiàn)場樣品的檢測中進行了應(yīng)用。本文

2、的主要研究內(nèi)容和結(jié)果包括以下幾個方面：1.建立了赤潮監(jiān)測中樣品采集處理、分離和純化培養(yǎng)的技術(shù)體系；建立和優(yōu)化了裸甲藻(Gymnodinium)掃描電鏡觀察技術(shù)和環(huán)境樣品的掃描電鏡觀察方法；提出了庫爾特計數(shù)是相對簡便、快捷、準(zhǔn)確、可行的細胞計數(shù)方法；應(yīng)用基于反相高效液相色譜(HPLC)的光合色素分析技術(shù)及原位熒光激發(fā)光譜測定方法,得出不同類群浮游植物對不同的營養(yǎng)鹽限制存在不同響應(yīng)機制的結(jié)論；用熒光強度來監(jiān)測浮游植物生理狀態(tài)及營養(yǎng)狀態(tài)變化具

3、有一定的可行性,HPLC和原位熒光兩種方法指示浮游植物的生理狀態(tài)存在一定差異。2.基于光合色素分析的化學(xué)分類方法能從光合色素組成和比例上區(qū)分一些赤潮藻的不同屬、屬下不同種甚至同種的不同地理株系,并可為進一步鑒定和細分這些赤潮生物提供重要的分類依據(jù)；用光合色素組成及其比值構(gòu)建的聚類分析能較好地反映赤潮生物間的親緣關(guān)系。用PCR產(chǎn)物分析的分子分類方法表明,基于18S rRNA序列檢測分析的變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術(shù)分類精確度不高；rD

4、NA序列分析相對可靠,尤其是針對轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)的長度和序列分析以及基于28S rRNA的D1、D2區(qū)序列分析,可以提供相對準(zhǔn)確的分類信息,為設(shè)計分子探針提供了依據(jù)；AP-PCR是以基因組的差異分析為基礎(chǔ),所以其分類信息較為豐富和全面?；贗TS序列建立的系統(tǒng)進化樹能顯示Takayama pulchellum和相關(guān)屬的親緣關(guān)系；用核糖體大亞基序列建立的系統(tǒng)發(fā)育樹可把Karlodinium屬和Takayama屬區(qū)分開,但不能很好地把環(huán)