桿狀病毒acmnpv的p6.9基因在病毒復制過程中的功能研究

1、王海花：桿狀病毒A c M N P V 的p 6 ．9 基岡在病毒復制過程中的功能研究中文摘要英文摘要符號說明目錄第一章文獻綜述??1 ．1 桿狀病毒簡介??????????????????????????????71 ．2 桿狀病毒的分類?????????????????????????????7l - 3 桿狀病毒的感染周期???????????????????????????91 ．3 ．1 桿狀病毒對蟲體的感染。1 ．3 ．2

2、桿狀病毒的離體復制1 ．3 ．2 ．1 病毒的侵入1 ．3 ．2 ．2 病毒復制的準備1 ．3 ．2 ．3 病毒D N A 復制和B V s 產生1 ．3 ．2 ．4P D V s 和包涵體的產生?1 01 11 21 21 21 ．4 桿狀病毒基因組????????????????????????????l 31 ．5 桿狀病毒表達載體系統?????????????????????????一1 31 ．5 ．1 桿狀病毒表達載體的特點

3、1 ．5 ．2B a c - t o ．B a c 操作系統1 4?．．．．．1 51 ．6A c M N P V p 6 ．9 基因背景知識簡介?????????????????????．1 61 ．7 本實驗的研究目的和研究意義??????????????????????．1 7第二章A c M N P V p 6 ．9 基因的克隆，原核表達，蛋白純化及抗體制各??????。1 82 ．1 材料???????。2 ．1 ．1 菌株和

4、質粒2 ．1 ．2 酶及試劑¨1 8．．1 82 ．1 ．3 培養(yǎng)基及電泳緩沖液。2 ．1 ．4S D S ．P A G E 電泳所需試劑．．?????1 9．1 9．1 9．2 0．2 0．2 1．2 1．2 1．2 2．2 3．2 3．2 3．2 3．2 4．2 4．2 5．2 52 ．1 ．5 S D S ．P A G E 電泳凝膠的灌制2 ．1 ．6 引物2 ．2 方法?????????2 ．2 ．1 大腸桿菌中質粒的

5、提取方法。2 ．2 ．2 大腸桿菌中B a e m i d 的提取法2 ．2 ．3 試劑盒回收D N A 片段2 ．2 ．4 C a C l 2 法制備感受態(tài)細胞???????．2 ．2 ．5 p 6 ．9 基因的克隆及重組表達載體的構建2 ．2 ．6 重組表達載體的誘導表達及其親和層析純化2 ．2 ．6 ．1 M B P ．P 6 ．9 融合蛋白的誘導表達及菌液破碎2 ．2 ．6 ．2 S D S ．P I A G E ?．2 ．2

6、．6 ．3 親和層析法純化M B P ．P 6 ．9 融合蛋白2 ．2 ．7 P 6 ．9 蛋白的抗血清制備2 ．3 結果2 ．3 ．1p 6 ．9 基因的克隆及重組表達載體的構建2 ．3 ．2 重組表達載體的誘導表達和純化2 52 6王?；ǎ簵U狀病毒A c M N - P V 的p 6 ．9 基因在病毒復制過程中的功能研究 3桿狀病毒A c M N P V 的p 6 ．9 基因在病毒復制過程中的功能研究研究生：王海花導師：梁昌鏞副教授

7、( 揚州大學，江蘇揚州，2 2 5 0 0 9 )摘要桿狀病毒在所感染的昆蟲宿主細胞中裝配時，會進行D N A 的壓縮和包裝。有研究表明這與桿狀病毒自身編碼的P 6 ．9 蛋白有關。該蛋白是一種富含精氨酸和絲氨酸的小蛋白，在功能上類似于組蛋白，根據病毒種類不同，大小在4 9 氨基酸到1 0 9 氨基酸之間。目前已測序的共5 0 多種桿狀病毒基因組中都有p 6 ．9 基因，顯示了p 6 ．9 基因在桿狀病毒進化過程中的保守性。本論文以A

8、c M N P V 為例，對桿狀病毒p 6 ．9 基因的功能進行研究。第一章：文獻綜述。概括介紹了桿狀病毒生物學、分子生物學研究進展和應用研究情況，并對桿狀病毒的p 6 ．9 基因進行了介紹。最后介紹了本論文的目的和意義。第二章：A c M N P V p 6 ．9 基因的克隆、原核表達和抗體制備。將p 6 ．9 基因編碼區(qū)克隆至原核表達載體p M A L ．c 2 x ，獲得p M A L - p 6 ．9 表達質粒，經I P T G

9、 誘導，M B P ．P 6 ．9 蛋白在大腸桿菌中獲得了高效表達，將表達產物純化，免疫家兔制備了A c M N P VP 6 ．9 蛋白的抗血清。第三章：缺失p 6 ．9 基因的A c M N P V 重組病毒的構建及其回復拯救。利用B a g - t o ．B a g操作系統，構建了缺失p 6 ．9 基因的重組B a c m i dv A c p 6 ·啪，利用轉座方法得到拯救型，缺失型和野生型B a g m i d ：v

10、 A c P h - g f p - p 6 ．9 - r e p ，v A c P h - g f P 嘶·‰與v A c P h ' g f P 。將三種B a c m i d 同時轉染和感染S f 9 細胞系．結果發(fā)現，缺失了p 6 ．9 基因的A c B a g m i d 不能完成病毒的整個復制過程，而拯救型和野生型卻可以，且具有相似的復制動力曲線。這表明p 6 ．9 基因是A c M N P V復制的必需基