基于熒光標記適配體的熒光各向異性法檢測小分子.pdf

1、第一章：對核酸適配體的性質和篩選作了簡要介紹，詳述了熒光各向異性（FA）法的定義和其在生物分析化學領域中的應用，闡述了本論文的立題背景，所研究的主要內容和創(chuàng)新點。
　　第二章：利用適配體具有親和力高、穩(wěn)定性好、易于合成和標記的優(yōu)點，結合熒光各向異性法簡單穩(wěn)定的特點，建立了一種非競爭性的基于四甲基羅丹明（TMR）熒光基團標記適配體的FA分析方法用于赭曲霉素A（OTA）的檢測。TMR和適配體堿基間存在的分子內作用力會影響TMR的局部轉

2、動和FA值，目標物與適配體結合后，適配體構象發(fā)生改變，引起分子內作用力改變，TMR的FA值也隨之變化。將TMR標記到OTA適配體的不同位點（適配體末端和T堿基）上，考察相應適配體對OTA的FA響應，發(fā)現第10個堿基T上標記有TMR的適配體（ T10-TMR-O36）展現出顯著的FA降低響應?；赥10-TMR-O36適配體的FA分析方法檢測OTA具有很高的靈敏度和很好的選擇性，檢出限為3 nM，檢測范圍為3 nM-3μM，OTA的結構類

3、似物不會對OTA的檢測產生干擾。
　　第三章：本章利用TMR標記的腺苷適配體發(fā)展了一種簡單高效的FA分析方法用于直接檢測腺苷。我們實現了將TMR標記于適配體的5'端、3'端、A堿基、C堿基和T堿基上，更為全面的考察了這些TMR標記適配體對腺苷的不同FA響應。適配體和腺苷結合后，TMR和它周圍的G堿基間的分子內作用力改變，引起TMR的局部轉動和FA值也發(fā)生變化。其中第16個堿基C上標記TMR的適配體C16-TMR-Ad25對腺苷展現

4、出最大的FA降低響應，并可檢測到2μM的腺苷。此外，此種FA分析方法還可應用于復雜基質中腺苷的檢測。
　　第四章：本章采用和前面兩章相似的檢測原理，建立了一種靈敏的三磷酸腺苷（ATP）檢測方法。用于檢測腺苷的適配體同樣適用于檢測ATP，我們篩選出對ATP有較大FA響應的兩個TMR標記的適配體，即在第16個堿基C上標記 TMR的 C16-TMR-Ad25和在第23個堿基 A上標記 TMR的A23-TMR-Ad25，這兩個適配體都可實