核殼柱液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)聯(lián)用及其在20種氨基酸檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、氨基酸是生命體基本物質(zhì)之一，也是常見的飼料添加劑、食品添加劑和藥物制劑成分。對(duì)于氨基酸分析目前存在樣品處理需進(jìn)行衍生化、衍生物不穩(wěn)定、運(yùn)行費(fèi)用高、儀器昂貴、反應(yīng)條件沖突、操作時(shí)間長(zhǎng)等問題。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是一種質(zhì)量檢測(cè)器，其檢測(cè)原理為依靠物質(zhì)的揮發(fā)性不同而進(jìn)行檢測(cè)，與物質(zhì)本身結(jié)構(gòu)沒有關(guān)系，適用于食品安全、藥物分析、中藥成分分析等領(lǐng)域。而Halo核殼色譜柱由于具有2.7μm的核殼多孔填料，能達(dá)到1.6μm填料的分離度的同時(shí)還具有在普通液相

2、色譜儀器上適用的柱壓，大大提高復(fù)雜產(chǎn)物的分離度?；谏鲜霰尘埃覀円哉舭l(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）、“HALO”核-殼型新型填料液相色譜柱聯(lián)用，初步構(gòu)建了一種高效液相色譜—蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPLC-ELSD）直接測(cè)定20種未衍生氨基酸的分析方法，并將其用于復(fù)方氨基酸注射液中氨基酸含量的測(cè)定。該方法快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、靈敏，對(duì)混合氨基酸進(jìn)行了有效的分離。
　　本論文總共分為五章，分別包括以下主要內(nèi)容：
　　第一章介紹選題背景和意

3、義。一介紹了氨基酸的種類和應(yīng)用，核殼色譜柱的簡(jiǎn)介和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的原理，綜述了氨基酸分析方法和研究進(jìn)展。
　　第二章主要采用HILIC色譜柱、新型色譜柱HALO柱、常規(guī)普通C18色譜柱、和HALO Amide柱對(duì)氨基酸的分離進(jìn)行了初步的篩選，發(fā)現(xiàn)普通C18色譜柱上要實(shí)現(xiàn)氨基酸的基線分離，運(yùn)行時(shí)間至少要40分鐘左右；HILIC柱內(nèi)徑為1.0 mm，實(shí)驗(yàn)中明顯發(fā)現(xiàn)該柱的柱容量和分離能力都相對(duì)較差，經(jīng)過流動(dòng)相種類和梯度的調(diào)整，明顯沒有

4、HALO柱的分離效果好；極性嵌入基團(tuán)的HALO Amide柱對(duì)前6種親水性較強(qiáng)氨基酸的分離并未能起到明顯的提高作用，同時(shí)因?yàn)橹诱w含碳量的降低，反而使得整體分離的情況稍有變差。對(duì)色譜柱柱長(zhǎng)的調(diào)整，在梯度不變運(yùn)行時(shí)間不變的情況下，氨基酸的保留明顯15 cm柱會(huì)更好些，柱長(zhǎng)增加，系統(tǒng)壓力仍在儀器耐壓范圍內(nèi)。綜合以上對(duì)比，15 cm的HALO C18色譜柱可以達(dá)到氨基酸的分離要求。
　　第三章主要構(gòu)建核殼柱液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)20

5、種未衍生氨基酸方法的開發(fā)。通過對(duì)流動(dòng)相中有機(jī)相種類、水相中三氟乙酸、七氟丁酸、九氟戊酸濃度、流速、柱溫等條件進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)進(jìn)行了蒸發(fā)光散射檢測(cè)器參數(shù)的優(yōu)化，最終確定了采用HALO C18柱（2.7μm，4.6 mm I.D.×15 cm），以甲醇-九氟戊酸-七氟丁酸-三氟乙酸-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速0.5 ml/min，ELSD飄移管溫度40℃，載氣流速3.0 L/min，對(duì)20種未衍生氨基酸進(jìn)行分離檢測(cè)。
　　第四章主要對(duì)

6、篩選的色譜方法進(jìn)行了分析方法驗(yàn)證。結(jié)果氨基酸的質(zhì)量濃度在0.01～1.0 mg/ml范圍內(nèi)，其峰面積的對(duì)數(shù)值與進(jìn)樣質(zhì)量的對(duì)數(shù)值呈良好的線性關(guān)系；氨基酸的檢出限介于20～50 ng之間，樣品加標(biāo)回收率為89.0％～111.2％。連續(xù)進(jìn)6針，各氨基酸的精密度均符合要求。不同儀器、不同批號(hào)色譜柱進(jìn)行系統(tǒng)實(shí)用性實(shí)驗(yàn)，均符合要求。該方法可直接進(jìn)行樣品檢測(cè)，無(wú)需樣品衍生化處理，簡(jiǎn)單、快捷。
　　第五章總結(jié)了本論文主要的三部分實(shí)驗(yàn)的研究成果，提