卡培他濱及其片劑的產業(yè)化研究.pdf

1、近幾年，鑒于我國目前的醫(yī)藥產業(yè)狀況，國家出臺了很多行業(yè)政策，以鼓勵已上市藥物大品種的技術改造，尤其是對已經上市“重磅炸彈”藥物的進行產業(yè)化研究;為了滿足臨床的需求，建立擁有自主知識產權的合成技術和制備工藝，使國產化的產品達到國際質量標準，從而替代進口，減輕患者家庭和國家醫(yī)療費用的負擔，以“國家十二五重大新藥創(chuàng)制專項”為依托，本課題進行了卡培他濱及其片劑的產業(yè)化研究。
　　根據國家最新的藥品技術及產品質量一致性評價要求，對產品雜質、

2、體內外釋放行為一致性的要求越來越嚴格，提出“雜質譜分析”、“一致性評價”的概念，對于雜質含量在0.1％以上的雜質進行結構鑒定及毒性評價，因此雜質控制及產品質量一致性成為制約產品產業(yè)化的關鍵因素。為實現(xiàn)產業(yè)化，需要解決下面兩個問題:1.原料:產品純度，雜質譜分析，雜質控制;2.制劑:產品穩(wěn)定性，體內外釋放行為的一致性。
　　在現(xiàn)有合成技術中，卡培他濱原料存在工業(yè)化生產規(guī)模較小，環(huán)境污染，成本高，純度低，含有雜質數(shù)量較多的缺點（其中美

3、國FDA標準是含有9個已知結構雜質和未知雜質，其雜質總含量為1.5％）。
　　本課題采用QbD的理念與方法，確定了30kg/批規(guī)模的中試生產放大工業(yè)化生產工藝以及符合GMP條件的工業(yè)化生產設備的選型、工藝流程設計，生產出高純度、高質量的卡培他濱原料藥;確定了10萬片/批規(guī)模的中試生產放大卡培他濱片的處方及工業(yè)化生產工藝及符合GMP條件的工業(yè)化生產設備的選型、工藝流程設計，制備出了穩(wěn)定性良好的卡培他濱片;首次建立了卡培他濱片體內外相

4、關性的分析方法，通過體內外實驗評價了卡培他濱片的質量穩(wěn)定性、均一性、一致性;建立了一套符合國際GMP標準的質量管理體系，使生產的產品質量達到國際水平。在合成工藝及片劑的穩(wěn)定性上均獲得了重大突破。課題具體研究內容包括:
　　1.基于QbD理念的卡培他濱生產工藝改進及質量控制
　　目的:確定卡培他濱的合成工藝路線和工業(yè)化生產工藝，建立卡培他濱原料藥的質量控制方法和限度。
　　方法:在卡培他濱原料藥合成工藝路線研究開發(fā)過程中

5、，應用QbD的思路來設計合成路線和生產工藝，首先界定目標產品的質量概況(QTPP)，確定其關鍵質量屬性(CQAs);對每一個單元操作，進行風險評估，利用實驗設計(DOE)方法對識別出的高風險變量進行研究，以確定關鍵物料屬性(CMAs)和關鍵工藝參數(shù)(CPPs)。綜合考慮原料藥合成工藝路線的反應條件、環(huán)保情況、產品精制與純化的可行性，并進行了30kg/批規(guī)模的中試生產放大以及符合GMP條件的工業(yè)化生產設備的選型、工藝流程設計。以雜質含量（

6、雜質含量達到國際標準）、成品收率(60-75％)、工藝路線適合于產業(yè)化生產為評價指標。
　　結果:以5-脫氧-1，2，3-三-O-乙?；?β-D-呋喃核糖和硅醚化的5-氟胞嘧啶為起始原料，經縮合、酯化、乙酰解三步反應制備卡培他濱，其中縮合反應中采用三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(TMSOTF)替代重金屬試劑四氯化錫作為糖苷化反應的縮合劑，反應量為1∶1.0～1.5，優(yōu)選1∶1.2;反應溫度優(yōu)選室溫20～25℃，反應條件溫和，TLC監(jiān)測反

7、應進行完全后(約反應15-16h)，以飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，可以減少副反應的發(fā)生，以異丙醇對所得油狀粗產品進行一次重結晶，即可得到白色中間體Ⅰ，HPLC檢測純度99％以上，收率83％～86％。酯化反應中采用中間體Ⅰ與氯甲酸正戊酯發(fā)生N4位上的酯化反應，反應量1∶1.4～1.8，優(yōu)選1∶1.4;采用無機堿K2CO3代替有機堿吡啶作為縛酸劑，反應量為1∶1.0～1.3，優(yōu)選1∶1.0;二甲氨基吡啶作為催化劑加速反應歷程，優(yōu)選反應量1∶0

8、.1～0.2;反應溫度冰浴(0～5℃)下，TLC監(jiān)測反應進行完全后(約反應45～60min)，以0.1mol/L稀鹽酸洗滌，以乙酸乙酯和正己烷的混合溶劑進行一次精制，即可得到白色中間體Ⅱ，HPLC檢測純度99％以上，收率85％～90％。乙酰解反應中，中間體Ⅱ在氫氧化鉀/15β-羥基介芬胺(5∶1)體系中脫乙?；?，反應量為1∶2.0～2.5，優(yōu)選1∶2.0，反應溫度為5～15℃，反應時間約45～60min，以二氯甲烷萃取，用飽和碳酸氫鈉水

9、溶液、水洗滌，用乙酸乙酯重結晶得到卡培他濱，HPLC檢測純度為99.8％，收率為85％～90％。
　　結論:確定卡培他濱的合成工藝路線和工業(yè)化生產工藝，建立了一套符合國際GMP標準的質量管理要求，以及起始原料和中間體雜質檢測方法，可實現(xiàn)過程控制，確保產品質量。建立卡培他濱原料藥的質量控制方法和限度。制備的卡培他濱純度高達99.8％，總收率69.6％，雜質含量小，除USP39版中已知雜質A、B、C外均未檢出其它雜質，其雜質含量遠小于

10、USP中本品質量標準中的雜質含量與數(shù)量（9個已知雜質）。
　　2.基于QbD理念的卡培他濱片生產工藝改進及質量控制
　　目的:確定卡培他濱片的處方組成和工業(yè)化生產工藝，建立卡培他濱片的質量控制方法和限度。
　　方法:應用QbD的思路來研發(fā)處方工藝，確保產品安全、有效、質量可控。根據原料在組方中含量較高、原料粘性大流動性不好，考慮到生產成本，采用傳統(tǒng)濕法制粒工藝進行壓片，根據原料的穩(wěn)定性，容易發(fā)生水解降解反應，采用傳統(tǒng)濕

11、法制粒工藝，粘合劑采用50％的藥用乙醇，控制片中的水分，從而控制降解雜質的產生，對工藝參數(shù)進行篩選，提高產品的穩(wěn)定性，保證釋放行為均一性。對處方中原料的粒度、粘合劑、稀釋劑、崩解劑、潤滑劑的用量及種類進行篩選，采用質量評價指標顆粒流動性、休止角、崩解時限、可壓性、含量均勻性、雜質、溶出行為與原研產品一致性等進行評價控制。制定商業(yè)化生產工藝（保證工藝受控）及生產的控制策略。并進行了10萬片/批規(guī)模的中試生產放大以及符合GMP條件的工業(yè)化生

12、產設備的選型、工藝流程設計。工藝路線適合于產業(yè)化生產。
　　結果:制劑選用50％的藥用乙醇為粘合劑采用濕法制粒工藝，選用無水乳糖和微晶纖維素作為主要稀釋劑，利用正交設計法優(yōu)選處方，最后選定的處方大大降低了三個降解產物的量，更好地保證了藥品的穩(wěn)定性，體外溶出試驗表明，溶出曲線與參比制劑相似，f2達70％以上，為體內的生物等效提供了良好的基礎保證。配方如下:卡培他濱0.5g、乳糖54mg、微晶纖維素28mg、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉20mg

13、、2％羥丙甲纖維素乙醇溶液20ml、二氧化硅6mg、硬脂酸鎂3mg、歐巴代包衣粉3％。
　　結論:確定卡培他濱片的工業(yè)化生產工藝，提升了產品的穩(wěn)定性，減少了降解雜質的產生;建立了中間體檢測方法，實現(xiàn)了過程控制，確保了產品的質量;建立卡培他濱片的質量控制方法和限度;建立了一套符合國際GMP標準的質量管理要求;終產品雜質含量小于參比制劑，體外釋放行為與參比制劑一致（f2因子＞70），產品質量達到國際質量標準要求。
　　3.卡培他

14、濱片的穩(wěn)定性研究
　　目的:考察卡培他濱片的穩(wěn)定性情況，確定產品工藝的可行性，制定上市后的貯存條件及有效期。
　　方法:根據現(xiàn)行的《原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導原則》，進行影響因素試驗、加速試驗和長期試驗的穩(wěn)定性考察，考察項目為性狀、溶出度、有關物質和含量。
　　結果:在光照、高濕RH92.5％及高溫60℃條件放置10天后，本品性狀、溶出度、有關物質及含量均未發(fā)生明顯變化，本品經加速試驗6個月和長期試驗18個月考察可

15、知，與0月相比較，各項考察指標均未發(fā)生顯著變化，各項指標均符合本品質量標準要求。
　　結論:表明本品對光照、高濕RH92.5％及高溫60℃相對穩(wěn)定。說明本品在該包裝條件下穩(wěn)定性較好。長期試驗繼續(xù)進行，以確定本品的最終有效期及貯藏條件。有效期暫定為24個月，貯存條件為密閉保存。
　　4.卡培他濱片體內外相關性研究
　　目的:研究卡培他濱片（自制品）與卡培他濱片(Xeloda(@))（參比品）在比格犬體內藥動學參數(shù)，計算卡

16、培他濱片的相對生物利用度及卡培他濱片體外釋放與體內吸收的相關性，為工藝優(yōu)化提供依據。
　　方法:健康比格犬12只，分別給予自制品和參比品各1片（規(guī)格0.5g），給藥后0～360min內靜脈取血。用高效液相色譜法測定血漿中卡培他濱濃度，房室模型計算其主要的藥動學參數(shù)，用Wanger-Nelson法對卡培他濱片在犬體內外相關性進行評價。
　　結果:自制品與參比品的半衰期(t1/2)分別為(1.06±0.52)和(1.08±0.5

17、4)h，達峰時間(tmax)分別為(1.0±0.52)和(1.0±0.41)h，峰濃度(Cmax)分別為(4.01±0.11)和(3.89±0.09)μg·L-1，濃度-時間曲線下面積(AUC0-t)分別為(9.04±1.36)和(9.12±1.26)μg·L-1·h，AUC0-∞分別為(9.89±1.35)和(9.96±2.01)μg·L-1·h。AUC0-6h可信限在0.80～1.25等效范圍內。體內吸收分數(shù)fa與體外水中釋放速率f