效應劑對關鍵酶和埃博霉素生物合成產量影響的研究.pdf

1、埃博霉素（Epothilone）是大環(huán)內酯類新型抗腫瘤活性物質，具有多種差異微小但功效相似的分子結構，命名源自其結構亞單位Epoxid（環(huán)氧）、Thiazole ring（噻唑環(huán)）、Ketone（酮基），其產品化的高效衍生物也有多種。
　　埃博霉素首次從纖維堆囊菌（Sorangium cellulosum）大量的次級代謝產物中被發(fā)現(xiàn)并報道，能有效遏止微管解聚，抗癌機制與紫杉醇相似，但是埃博霉素的優(yōu)勢有很多，分子具有相對簡單的結構，

2、具有可溶解于水，癌細胞種類選擇性廣、活性強、經改造的衍生物毒副作用明顯減小、面對耐受性腫瘤細胞也具有較高的抗癌活性等一系列優(yōu)點，研究和應用價值不可小覷。
　　丙酮酸激酶（PK）、S-腺苷甲硫氨酸合成酶（SAMS）和α-酮戊二酸脫氫酶復合體（OGDHC）這三種關鍵酶被認為在生物合成埃博霉素的過程中至關重要，維生素K3（VK3）和果糖-1,6-二磷酸（FDP）是 PK的抑制劑和激活劑；次氯酸鈉（NaClO）和雙氧水（H2O2）是OGD

3、HC的抑制劑、對甲苯磺酸鈉（p-TSA-Na）和吲哚乙酸（IAA）對SAMs分別具有激活和抑制效果。
　　通過測定并描述關鍵酶比活力、埃博霉素生物合成的產量、發(fā)酵周期內菌體干重、培養(yǎng)基pH值變化規(guī)律和消耗還原糖變化趨勢、對比單位質量菌體合成埃博霉素量，借助Q-PCR技術獲得目的基因相對定量的倍數(shù)關系，研究效應劑對關鍵酶和埃博霉素產量的改觀。
　　實驗發(fā)現(xiàn)四種抑制劑和兩種激活劑對上述參數(shù)的影響程度不同，對比發(fā)現(xiàn)IAA和VK3的

4、抑制效果明顯且是有限度的，NaClO和H2O2產生全面強烈的抑制效果，打破菌體自然生長變化的趨勢。p-TSA-Na的綜合激活效果比FDP更優(yōu)越。
　　埃博霉素生物合成產量與對甲苯磺酸鈉濃度1～32mmol/L范圍內呈正相關關系，在4～16mmol/L范圍內最明顯，充分說明添加對甲苯磺酸鈉與埃博霉素生物合成產量提高有密切關聯(lián)。
　　后續(xù)實驗證明，在發(fā)酵接種時，對甲苯磺酸鈉濃度達到24mmol/L時，埃博霉素產量出現(xiàn)最大的增進效