新型胍基蛋白折疊色譜固定相的合成及其對rhG-CSF的復性純化研究.pdf

1、蛋白質(zhì)復性技術是生物工程下游的熱門技術之一。本實驗合成了以精氨酸和肌酸為端基的兩種新型胍基蛋白折疊色譜固定相，深入研究了精氨酸型胍基蛋白折疊色譜固定相的色譜性能，并將其應用于含有兩對二硫鍵的重組人粒細胞集落刺激因子(recombinanthumangranulocytecolony—stimulatingfactor，rhG—CSF)的復性純化研究中。本文主要包括以下4個部分： 1、文獻綜述：簡要介紹了蛋白質(zhì)復性的意義及一般過程

2、，詳細論述了蛋白折疊液相色譜法，總結(jié)了色譜固定相及精氨酸對于蛋白折疊的作用，綜述了rhG—CSF復性純化的研究進展。包括58篇文獻。 2、以硅膠為基質(zhì)，合成了以精氨酸和肌酸為末端的兩種新型胍基蛋白折疊色譜固定相。用5種標準酸性蛋白比較了其色譜分離性能，發(fā)現(xiàn)精氨酸型色譜固定相的色譜性能更好。 3、探討了在不同pH值，不同流速條件下5種酸性蛋白在精氨酸型胍基色譜固定相上的分離情況；測定蛋白在柱上的質(zhì)量回收率大于95％；在選用

3、BSA為模型蛋白時測定柱填料的最大吸附量大于46.1mg/g。實驗結(jié)果表明，該種精氨酸型胍基蛋白折疊色譜固定相具有典型的陰離子交換性質(zhì)，對標準蛋白具有很好的分離效果，柱容量大，非特異性吸附小。 4、利用合成的精氨酸型胍基蛋白折疊色譜固定相對在大腸桿菌中表達的rhG—CSF進行了復性純化，研究了不同的梯度、pH值、脲濃度及流速對rhG—CSF復性的影響。在最優(yōu)條件下，30分鐘內(nèi)通過一步復性純化得到了純度為95.24％，質(zhì)量回收率為