地衣芽胞桿菌遺傳改良及在淀粉脫支酶表達中的應(yīng)用.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩58頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、脫支酶是淀粉酶系中重要的酶品,為淀粉徹底水解所必需。目前為止能夠高效專一水解淀粉分子中α-1,6糖苷鍵的脫支酶主要有兩種:普魯蘭酶和異淀粉酶。本課題組前期研究中建立了較為完善的地衣芽胞桿菌表達系統(tǒng),并已成功應(yīng)用于α-淀粉酶、β-淀粉酶的高效表達,為此,本研究嘗試了其對普魯蘭酶和異淀粉酶的異源表達,主要內(nèi)容如下:
  以地衣芽胞桿菌Z902(Δamy)表達系統(tǒng)為基礎(chǔ),構(gòu)建了堿性蛋白酶基因缺失的突變菌株Z113,后者胞外蛋白酶活力為前

2、者的21%,明顯減少了蛋白酶的分泌,同時堿性蛋白酶基因的缺失對菌體的正常生長影響甚微。
  普魯蘭酶和異淀粉酶在地衣芽胞桿菌中的游離表達:將含有普魯蘭酶基因的表達載體pBE-pulB,電轉(zhuǎn)化入地衣芽胞桿菌Z902和Z113,進行搖瓶發(fā)酵,對比兩種重組菌的產(chǎn)酶特征。結(jié)果表明,重組菌Z902/pulB的發(fā)酵液里沒有檢測到酶活力,而Z113/pulB的酶活力達41 U/mL,是本實驗室前期研究中最高產(chǎn)酶水平的2倍,普魯蘭酶表達水平得到進

3、一步提高,同時表明堿性蛋白酶基因刪除的必要性。
  通過PCR擴增異淀粉酶編碼基因iso并克隆入表達載體pHY-WZX,在枯草桿菌1A717中獲得重組質(zhì)粒,將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化入Z902、Z113中,搖瓶發(fā)酵Z902/ISO酶活力達330 U/mL,而Z113/ISO酶活力達425 U/mL,實現(xiàn)了異淀粉酶的高效表達。Z113/ISO基本酶學(xué)特征分析表明:該重組酶適宜反應(yīng)條件為50-55℃,pH6.5-9.0; K+、Ca2+

4、、Mg2+離子對其有促進作用,其它離子或化合物強烈抑制其酶活;底物特異性為:支鏈淀粉>糖原>糯米淀粉>普魯蘭糖。
  進一步分析了普魯蘭酶和異淀粉酶在水解糊精制備麥芽糖漿中作用,結(jié)果,與單獨使用β-淀粉酶相比,這兩種脫支酶分別和β-淀粉酶復(fù)配使用都能夠顯著提高麥芽糖的生成率,分別達78.61%和76.35%,但異淀粉酶與普魯蘭酶相比,生成的麥芽糖純度更高,更有助于高純度麥芽糖漿的制備。
  由于游離表達畢竟存在其遺傳不穩(wěn)定性

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論