簡(jiǎn)介：懸浮力學(xué)狀態(tài)通過誘導(dǎo)整合素Β1表達(dá)上調(diào)促進(jìn)乳腺腫瘤細(xì)胞的外滲重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)術(shù)學(xué)位學(xué)生姓名張瑩指導(dǎo)教師張兵兵講師呂永鋼教授專業(yè)生物學(xué)學(xué)科門類理學(xué)重慶大學(xué)生物工程學(xué)院二O一七年四月重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要I摘要腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征，大多數(shù)腫瘤患者并非死于原發(fā)性癌而是死于轉(zhuǎn)移性癌。近年來，針對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞CIRCULATINGTUMORCELLS,CTCS外滲機(jī)制的研究已成為抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的新熱點(diǎn)。本課題采用懸浮培養(yǎng)的方法模擬CTCS在血液循環(huán)系統(tǒng)中的懸浮力學(xué)狀態(tài)，探討懸浮力學(xué)狀態(tài)對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間相互作用的影響，重點(diǎn)考察了細(xì)胞粘附分子CELLADHESIONMOLECULES,CAMS整合素Β1INTEGRINΒ1在該過程中所扮演的角色。主要研究工作和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下①懸浮培養(yǎng)促進(jìn)懸浮培養(yǎng)促進(jìn)乳腺腫瘤乳腺腫瘤細(xì)胞細(xì)胞的外滲的外滲通過流動(dòng)腔粘附實(shí)驗(yàn)和TRANSWELL細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)貼壁組和懸浮組MDAMB231乳腺腫瘤細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞層的粘附能力、鋪展能力及跨內(nèi)皮遷移能力。流動(dòng)腔粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明經(jīng)懸浮培養(yǎng)1天或3天的MDAMB231細(xì)胞，其在內(nèi)皮細(xì)胞層的粘附能力顯著強(qiáng)于貼壁組P005，懸浮培養(yǎng)1天和3天之間無顯著性差異。利用軟件IMAGEJ對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞的鋪展形態(tài)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明在相同共孵育時(shí)間下，懸浮組MDAMB231細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞層的鋪展面積顯著大于貼壁組P001；共孵育6小時(shí)，懸浮組MDAMB231細(xì)胞圓度顯著小于貼壁組。TRANSWELL細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明懸浮組MDAMB231細(xì)胞發(fā)生跨內(nèi)皮遷移的細(xì)胞數(shù)量顯著多于貼壁組P001。②懸浮力學(xué)狀態(tài)誘導(dǎo)整合素懸浮力學(xué)狀態(tài)誘導(dǎo)整合素Β1高表達(dá)高表達(dá)通過QPCR和免疫印跡法檢測(cè)貼壁組和懸浮組MDAMB231細(xì)胞整合素Β1的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明懸浮培養(yǎng)使得整合素Β1在基因水平的表達(dá)量提高了235±058倍P005，在蛋白水平的表達(dá)量提高了217±040倍P001。通過SIRNA技術(shù)對(duì)整合素Β1進(jìn)行敲低處理，QPCR結(jié)果表明貼壁組MDAMB231細(xì)胞的整合素Β1在基因水平上降低了62貼壁對(duì)照組化1處理，P001，敲低效果極顯著；懸浮組MDAMB231細(xì)胞的整合素Β1在基因水平上降低了74P001，敲低效果極顯著。免疫印跡法結(jié)果表明整合素Β1敲低處理后，貼壁組MDAMB231細(xì)胞的整合素Β1在蛋達(dá)水平上降低了39貼壁對(duì)照組化1處理，P001，敲低效果極顯著；懸浮組MDAMB231細(xì)胞的整合素Β1在蛋白水平上降低了80P001，敲低效果極顯著。③整合素整合素Β1對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞外滲的對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞外滲的影響影響設(shè)置貼壁對(duì)照組ADCTRL、貼壁整合素Β1敲低組ADITGB1、懸浮對(duì)照組SUSPCTRL、懸浮整合素Β1敲低組SUSPITGB1，通過流動(dòng)腔粘附實(shí)驗(yàn)、鋪展實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)介：目前，在女性的癌癥死亡病例當(dāng)中，乳腺癌占有很大的比例，其較高的死亡率主要是因?yàn)槿橄侔┘?xì)胞擁有較高的轉(zhuǎn)移性。據(jù)報(bào)道，90％以上的乳腺癌患者晚期都會(huì)發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，最常見的是肺部轉(zhuǎn)移。因此在治療乳腺癌時(shí)有效地抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移就顯得意義重大。本文采用的方案是構(gòu)建一種高分子納米載藥系統(tǒng)對(duì)抗癌藥物進(jìn)行包載，實(shí)現(xiàn)藥物對(duì)腫瘤原發(fā)部位和轉(zhuǎn)移灶的靶向治療。在實(shí)驗(yàn)開始階段我們建立了高效液相色譜法對(duì)卡巴他賽進(jìn)行體外分析。通過全波長(zhǎng)掃描我們選定了最適合的檢測(cè)波長(zhǎng)230NM查閱文獻(xiàn)并經(jīng)過實(shí)際實(shí)驗(yàn)摸索確定最終的液相色譜條件；該檢測(cè)方法專屬性良好，輔料的引入不會(huì)對(duì)峰形和峰位產(chǎn)生干擾；在不同的藥物濃度條件下的回收率均在955之間，表明了輔料同樣不會(huì)影響藥物含量的測(cè)定；在1ΜGML400ΜGML藥物濃度范圍內(nèi)，藥物濃度與液相色譜峰面積存在良好的線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R2099991日間進(jìn)樣和日內(nèi)進(jìn)樣結(jié)果的精密度都達(dá)到方法學(xué)要求，RSD值均小于2，表明測(cè)定方法穩(wěn)定；藥物含量測(cè)定結(jié)果與標(biāo)示的理論濃度比值在99362784之間，測(cè)量準(zhǔn)確度較高。通過眾多的方法學(xué)驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)證明了所建立的高效液相色譜法體外分析卡巴他賽的可行性良好。選用聚乙二醇PEG進(jìn)行修飾的聚己內(nèi)酯（PCLPCL6500PEG5000做為載體材料，采用薄膜水化超聲法對(duì)抗癌藥卡巴他賽（CABAZITAXEL進(jìn)行了包載，形成載藥納米膠束（PCM。在體外對(duì)納米膠束的粒徑、電位、形態(tài)、包封率、載藥量、釋藥行為、血液中的分散穩(wěn)定性進(jìn)行考察。結(jié)果顯示制備的PCM表面圓整均一，在水溶液中的強(qiáng)度平均粒徑5013±1196NM，分布PDI為0256，帶有負(fù)電荷（203±012MV對(duì)藥物卡巴他賽的包封率高達(dá)97，表明模型藥物能夠被載體系統(tǒng)很好地包載將PCM分散在PH74緩沖鹽中，隨時(shí)間變化，粒徑在24H內(nèi)變化不超過24NM；對(duì)分散在PH74和PH50兩種PBS的納米聚合物膠束的包封率按時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示包封率并未隨時(shí)間改變，均在97左右，說明藥物能夠在血液循環(huán)系統(tǒng)中穩(wěn)定存在而不會(huì)提前將藥物泄漏。選用高轉(zhuǎn)移性的4T1乳腺癌細(xì)胞作為用藥對(duì)象，分別考察了載藥納米膠束和卡巴他賽注射液對(duì)細(xì)胞毒性、細(xì)胞攝取和腫瘤細(xì)胞侵襲迀移能力的影響。結(jié)果表明腫瘤細(xì)胞能夠?qū){米聚合物膠束大量攝取，共定位結(jié)果顯示富集在細(xì)胞質(zhì)中。在極低的藥物濃度（10NGML下，腫瘤細(xì)胞的侵襲和迀移活動(dòng)就能被很好地抑制，卡巴他賽注射液組的細(xì)胞只有925迀移到TRANSWELL膜的另一面和891的侵襲抑制，而PCM抑制了91以上的細(xì)胞迀移和90的細(xì)胞侵襲。表明了PCM能夠?qū)θ橄侔┘?xì)胞的轉(zhuǎn)移產(chǎn)生顯著的抑制效果。同時(shí)，細(xì)胞毒性結(jié)果顯示了在10NGML濃度下，細(xì)胞存活率在80以上，細(xì)胞能夠正常生長(zhǎng)。本文在NUNU裸鼠身上種植高轉(zhuǎn)移性乳腺癌4T1細(xì)胞構(gòu)建了乳腺癌皮下瘤模型，用以評(píng)價(jià)納米聚合物膠束在體內(nèi)的分布和PCM對(duì)乳腺癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的抑制效果。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明隨時(shí)間推移，PCM能在腫瘤處大量富集，8H最大，隨后被代謝。離體結(jié)果顯示納米膠束在腫瘤分布顯著高于其他器官，其次是在肺部有聚集。與生理鹽水組比較，注射液組（CTX和PCM都能對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)產(chǎn)生顯著性的抑制，分別只有對(duì)照組腫瘤大小的355±62和258±58。載藥納米膠束組抑制效果略優(yōu)于普通注射液。肺轉(zhuǎn)移結(jié)果顯示普通卡巴他賽注射液有86左右的轉(zhuǎn)移抑制率，如果對(duì)藥物進(jìn)行高分子聚合物包載后轉(zhuǎn)移抑制效果得到更進(jìn)一步的提升。上述結(jié)果表明廣泛應(yīng)用于治療前列腺癌的藥物一卡巴他賽能夠?qū)θ橄侔┑纳L(zhǎng)和肺部轉(zhuǎn)移產(chǎn)生顯著性的抑制效果。同時(shí)若對(duì)藥物利用高分子聚合PCL6500PEG5000進(jìn)行包載形成納米膠束后，對(duì)乳腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移抑制能力都得到進(jìn)一步的提升。本研究拓寬了卡巴他賽的臨床應(yīng)用范圍，也對(duì)乳腺癌的治療進(jìn)行了一次新的探索。

簡(jiǎn)介：背景乳腺癌影響婦女身心健康，嚴(yán)重時(shí)危及生命，在我國(guó)女性惡性腫瘤中排在首位。在全球范圍內(nèi)，我國(guó)占據(jù)每年新診斷乳腺癌病例約122％，死亡病例約96?；蛲蛔兒透邼舛燃に氐鹊拈L(zhǎng)期作用是乳腺癌產(chǎn)生的高危因素，對(duì)于有著高危因素的患者可以給予預(yù)防性的雙側(cè)“乳腺切除術(shù)”或“卵巢切除”，因手術(shù)存在很多的副作用，實(shí)行手術(shù)前應(yīng)考慮全面，權(quán)衡利弊。乳腺癌除了手術(shù)治療外，還有新輔助治療和輔助治療。各種治療的綜合運(yùn)用，使乳腺癌的臨床療效有了明顯的提高。乳腺癌的分子分型及其指導(dǎo)下的分類治療，以及精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)是當(dāng)今研究熱點(diǎn)。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展除了基因突變這個(gè)因素外，表觀修飾也日益受到關(guān)注。乙?；腿ヒ阴；潜碛^修飾里非常重要的修飾方式。組蛋白乙酰化和去乙?；綄?duì)于真核細(xì)胞的染色質(zhì)的重組和基因的表達(dá)有著重要的影響，組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶HAT和組蛋白去乙?；窰DAC相互制約，負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)核心組蛋白乙?；腿ヒ阴；膭?dòng)態(tài)平衡組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶和組蛋白去乙?；傅恼{(diào)節(jié)失去平衡時(shí)，會(huì)導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄改變，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。組蛋白去乙酰化酶通過使組蛋白去乙?；孌NA更緊地纏繞在組蛋白上，從而導(dǎo)致這些DNA不易被基因轉(zhuǎn)錄因子接觸，影響與細(xì)胞增值、周期、凋亡等有關(guān)的蛋白的表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，所以近年來組蛋白去乙?；钢饾u成為抗腫瘤藥研究的新靶點(diǎn)各種組蛋白去乙?；敢种苿℉DACI）在癌癥的表觀修飾方面的作用已逐漸被發(fā)現(xiàn)，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究，中國(guó)自主研發(fā)的HDACI類藥物西達(dá)本胺在機(jī)制研究方面還相對(duì)偏少，尤其在乳腺癌上的作用機(jī)制還尚不清楚。目的組蛋白去乙?；敢种苿┦且环N新型的抗癌藥物，能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)，阻滯細(xì)胞周期和促進(jìn)細(xì)胞凋亡。一個(gè)非常重要的口服HDACI類藥物西達(dá)本胺（CHIDAE），單藥或聯(lián)合在淋巴造血系統(tǒng)腫瘤或固體瘤中使用，都表現(xiàn)出了很好的抗腫瘤作用，在較多的腫瘤中都具有明顯的周期阻滯和促進(jìn)凋亡的作用，但詳細(xì)的分子機(jī)制還不是特別清楚。本實(shí)驗(yàn)觀察西達(dá)本胺體外對(duì)乳腺癌MCF7和MDAMB453細(xì)胞增殖、形態(tài)、凋亡和周期的影響，并研究其可能的抗腫瘤作用機(jī)制。方法在96孔板上按照5X103個(gè)孔種板，待細(xì)胞貼壁后用西達(dá)本胺（0、20、40、60、80、100ΜMOLL）對(duì)MCF7和MDAMB453細(xì)胞分別處理24、48、72小時(shí)，用7SEACCK對(duì)細(xì)胞的增殖情況進(jìn)行評(píng)估，計(jì)算細(xì)胞被抑制的情況。在6孔板上按照3X105個(gè)孔種板，待細(xì)胞貼壁后用西達(dá)本胺（0、20、40、80ΜMOLL）對(duì)MCF7和MDAMB453細(xì)胞分別處理48小時(shí)，收集處理后的細(xì)胞至流式管，并加入DNA染色液（STAININGSOLUTION）和滲透液（PERMEABILIZATIONSOLUTION），混勻后避光孵育30分鐘，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布；用相同的方法收集細(xì)胞至流式管后，加入BINDINGBUFFER、FITCANNEXIN和PI，混勻后避光孵育15分鐘，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。將6孔板上經(jīng)過西達(dá)本胺（0、20、40、80ΜMOLL）處理48小時(shí)的細(xì)胞用細(xì)胞刮收集到EP管，用裂解液提取蛋白，并用BCA測(cè)蛋白濃度。通過跑電泳將目的蛋白與其他蛋白分離開來，經(jīng)過轉(zhuǎn)膜將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，孵一抗和二抗，再通過顯影劑使目的蛋白顯影。先用PRIMERPREMIER軟件設(shè)計(jì)引物，由專門公司合成。使用TRIZOL提取總MRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將MRNA逆轉(zhuǎn)為CDNA，再用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)CT值，用2ΔΔCT計(jì)算分析結(jié)果。結(jié)果經(jīng)西達(dá)本胺（0，20，40，80，100ΜM）處理的MCF7和MDAMB453細(xì)胞增殖均被抑制，呈一定的時(shí)間和濃度依賴性，在24小時(shí)時(shí)抑制作用較弱，抑制率都在25以下；當(dāng)較高濃度西達(dá)本胺作用48或72小時(shí)，MDAMB453和MCF7細(xì)胞一樣，抑制率都為90左右。西達(dá)本胺作用于乳腺癌細(xì)胞后，細(xì)胞邊緣變得不規(guī)則，細(xì)胞碎片增多，并出現(xiàn)大量的懸浮細(xì)胞。2種乳腺癌細(xì)胞經(jīng)西達(dá)本胺（濃度分別為0、20、40和80ΜMOLL）處理48小時(shí)后，隨著藥物濃度的提高，MCF7和MDAMB453細(xì)胞的凋亡率逐漸增加，分別從36±104升至3303±575和307±064升至266±66；細(xì)胞周期分布中G2M期也增加的非常明顯，分別從1345±573升至2745±844和1895±148升至344±1467。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和WESTERNBLOT提示西達(dá)本胺可明顯下調(diào)兩種乳腺癌細(xì)胞BCL2、PROCASPASE3、PROPARP和CYCLINB2的表達(dá)水平，上調(diào)BAX、P21和CLEAVEDPARP的表達(dá)水平。結(jié)論西達(dá)本胺作為新的HDACI類藥物可能通過誘導(dǎo)MCF7和MDAMB453細(xì)胞凋亡和使細(xì)胞阻滯在G2M期發(fā)揮體外抗乳腺癌細(xì)胞增殖的作用，其作用機(jī)制可能涉及對(duì)BAX、P21、BCL2、CLEAVEDPARP、PROCASPASE3、PROPARP和CYCLINB2表達(dá)的調(diào)控。

簡(jiǎn)介：目的應(yīng)用LOGISTIC回歸模型探討乳腺影像報(bào)告數(shù)據(jù)系統(tǒng)BIRADS中的超聲診斷指標(biāo)在乳腺腫塊良、惡性鑒別中的應(yīng)用價(jià)值，基于此建立乳腺超聲影像報(bào)告數(shù)據(jù)系統(tǒng)分類（3～5類）評(píng)分系統(tǒng)，并對(duì)各乳腺腫塊評(píng)分并分類，旨在為超聲醫(yī)師提供客觀有效的評(píng)估分類標(biāo)準(zhǔn)。方法回顧分析在安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院行乳腺超聲檢查的401例乳腺腫塊超聲圖像特征，結(jié)合手術(shù)或穿刺活檢病理結(jié)果以第5版乳腺影像報(bào)告與數(shù)據(jù)系統(tǒng)病灶超聲特征并加入年齡因素，建立LOGISTIC回歸模型；依據(jù)回歸模型篩選結(jié)果及各因素的權(quán)重提出BIRADS3～5類評(píng)分分類標(biāo)準(zhǔn)。另納入243例乳腺腫塊作為測(cè)試組，對(duì)所有研究病例分別進(jìn)行評(píng)分分類，以病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算每類的陽性預(yù)測(cè)值，與BIRADS各類別的理論風(fēng)險(xiǎn)范圍相比較，觀察兩者的一致性，評(píng)估該評(píng)分分類系統(tǒng)的診斷價(jià)值。結(jié)果1、多因素回歸分析顯示最后進(jìn)入模型的因素共6個(gè)分別為年齡（≥40歲）、方位（不平行）、形態(tài)（不規(guī)則）、內(nèi)部回聲（不均勻）、邊緣（不光整）、腫塊內(nèi)微鈣化。2、依據(jù)回歸模型篩選結(jié)果及各因素對(duì)腫塊良、惡性貢獻(xiàn)率不同，制定評(píng)分分類系統(tǒng)，BIRADS3、4A、4B、4C、5類相對(duì)應(yīng)的分值為6分、7～8分、9～15分，16～22分，≥23分。3、模型病例綜合評(píng)分的BIRADS3～5類的陽性預(yù)測(cè)值分別為0、267、1618、9074、100；測(cè)試病例綜合評(píng)分的BIRADS3～5類的陽性預(yù)測(cè)值分別為0、417、2143、8485、100；所有研究病例綜合評(píng)分的BIRADS3～5類的陽性預(yù)測(cè)值為0、325、1770、8851、100。4、測(cè)試病例ROC曲線下分析，曲線下面積為0948。以14分作為乳腺腫塊良惡性的CUTOFF值（診斷界點(diǎn)），其靈敏度為9010、特異度9014、約登指數(shù)080、準(zhǔn)確率9012。結(jié)論利用多因素建立的乳腺腫塊LOGISTIC回歸模型并以此制定的BIRADS評(píng)分分類系統(tǒng)，能夠?qū)θ橄倌[塊BIRADS系統(tǒng)進(jìn)行客觀的分類，為臨床評(píng)價(jià)乳腺腫塊的良、惡性提供有效參考依據(jù)。

簡(jiǎn)介：安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)學(xué)位論文超支化聚磷酸酯納米藥物引導(dǎo)的化療協(xié)同光熱療法用于逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞耐藥的研究HYPERBRANCHEDPOLYPHOSPHOESTERMICELLARNANOMEDICINEFORNIRIMAGINGGUIDEDTHERMOCHEMOTHERAPYTOREVERSEACQUIREDRESISTANCEOFBREASTCANCERCELLS姚夢(mèng)群姚夢(mèng)群指導(dǎo)教師姓名仲飛副教授安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱腫瘤學(xué)提交論文日期201703論文答辯日期201705學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)答辯委員會(huì)主席夏黎明教授評(píng)閱人雙盲評(píng)閱2017年05月安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文

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簡(jiǎn)介：?帥川LILILLILII㈣?Ⅲ?洲Y3345675分類號(hào)R730．51密級(jí)公開圜單位代碼10159學(xué)號(hào)201353049碩士學(xué)位論文中文題目同等學(xué)力人員申請(qǐng)碩士學(xué)位臍帶血來源的INKT細(xì)胞體外培養(yǎng)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞殺傷作用的研究；∈文題目PREPARATIONOFINKTCELLSDERIVED仔OMUMBILICALCORDBLOODANDANALYSISOFCYTOTOXICEF詫CTTOBREASTCANCERCELLSINVITRO論文作者指導(dǎo)教師I鼉孟凡東教授‰中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，論文中除加以標(biāo)注的內(nèi)容外，不包含其他人或機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含本人為獲得其他學(xué)位而使用過的成果。對(duì)本研究提供貢獻(xiàn)的其他個(gè)人和集體均已在文中進(jìn)行了明確的說明并表示謝意。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。論文作者簽名王也日期多D『7年F7月弓D日中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的原件、復(fù)印件和電子版，允許學(xué)位論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國(guó)醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密，在年后解密適用本授權(quán)書。保密請(qǐng)?jiān)诶ㄌ?hào)內(nèi)劃“√“論文作者簽名王趁日期ZDFL年，，月鄉(xiāng)汐日指導(dǎo)教師簽名缸氧日期加／7年／／月；口日

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文必需氨基酸濃度對(duì)奶牛乳腺酪蛋白Α基因表達(dá)的影響姓名來金良申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)指導(dǎo)教師吳躍明劉建新200605012006浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文縮略詞

簡(jiǎn)介：目的本實(shí)驗(yàn)通過觀察干酪乳桿菌（LACTOBACILLUSCASEI）對(duì)二甲基苯蒽（DMBA）誘發(fā)乳腺癌大鼠的血清中細(xì)胞因子和外周血中自然殺傷NK細(xì)胞活性、T淋巴細(xì)胞亞群分布的影響來評(píng)價(jià)干酪乳桿菌對(duì)乳腺癌大鼠免疫功能的調(diào)節(jié)。通過觀察干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘發(fā)乳腺癌大鼠的腸道菌群和腸道連接蛋白表達(dá)的影響來評(píng)價(jià)干酪乳桿菌對(duì)乳腺癌大鼠腸道屏障功能的調(diào)節(jié)。為進(jìn)一步闡述干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘發(fā)的大鼠乳腺腫瘤的抑制作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘發(fā)乳腺腫瘤的抑制作用及其免疫功能的影響。（1）動(dòng)物分組及乳腺癌模型建立60只雌性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、干酪乳桿菌劑量1組和干酪乳桿菌劑量2組。模型組及干酪乳桿菌劑量1組和2組大鼠右側(cè)臀部皮下一次性注射100MGKGDMBA建立乳腺癌模型。干酪乳桿菌劑量1組和2組分別灌胃給予4MLKGD和8MLKGD干酪乳桿菌（1108CFUML），正常對(duì)照組和模型組均給予5MLKGD大豆油灌胃。每天1次，持續(xù)16周后處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血并留取胸腺，脾臟，小腸組織。（2）計(jì)算各組大鼠乳腺癌發(fā)生率、潛伏期、平均瘤重、抑瘤率及臟器指數(shù)。（3）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)大鼠外周血中NK細(xì)胞活性和T淋巴細(xì)胞亞群分布。（4）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA檢測(cè)血清中細(xì)胞因子白介素4（IL4）、IL6、IL10、IL12、干擾素Γ（IFNΓ）和腫瘤壞死因子Α（TNF?。┑乃?。2干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘導(dǎo)乳腺癌大鼠腸道菌群和腸道屏障功能的影響。（1）實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QPCR）檢測(cè)大鼠腸道菌群的變化。（2）HE染色觀察大鼠空腸組織病理學(xué)改變。（3）ELISA檢測(cè)大鼠血清中D乳酸（DLA）水平。（4）WESTERNBLOTTING檢測(cè)大鼠空腸組織緊密連接蛋白OCCLUDIN和ZO1的表達(dá)水平。結(jié)果1干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘發(fā)乳腺腫瘤的抑制作用及其免疫功能的影響。（1）正常對(duì)照組大鼠無腫瘤發(fā)生，而模型組、干酪乳桿菌劑量1組和2組均有腫瘤發(fā)生。與模型組比較，干酪乳桿菌劑量2組大鼠腫瘤潛伏期延長(zhǎng)，腫瘤發(fā)生率和平均瘤質(zhì)量降低（P＜005）；抑瘤率達(dá)到412；且該組胸腺指數(shù)顯著升高（P＜005）；（2）流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與模型組比較，干酪乳桿菌劑量2組大鼠TCRΑΒCD161ANK細(xì)胞百分比、CD3CD8T細(xì)胞百分比均顯著升高（P＜005）；而血中CD3FOXP3細(xì)胞百分比明顯下降（P＜005）。（3）與正常對(duì)照組比較，模型組IL4水平明顯降低，而IL6、IL12和TNFΑ水平顯著升高（P＜005）；與模型組比較，干酪乳桿菌劑量2組血清IL4、IL10濃度顯著增高，IL6、IL12濃度顯著下降（P＜005）；干酪乳桿菌劑量1組和2組TNFΑ濃度均顯著下降（P＜005）。2干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘導(dǎo)乳腺癌大鼠腸道菌群和腸道屏障功能的影響。（1）QPCR結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組雙歧桿菌、乳酸桿菌和糞腸球菌數(shù)量均下降，其中雙歧桿菌和糞腸球菌數(shù)量下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）；干酪乳桿菌劑量1組和2組雙歧桿菌數(shù)量均比模型組顯著升高（P＜005），而大腸桿菌的數(shù)量有所降低。（2）HE染色結(jié)果顯示，與模型組比較，干酪乳桿菌劑量1組和2組大鼠空腸內(nèi)絨毛和隱窩的形態(tài)明顯完整，結(jié)構(gòu)清晰，絨毛的損傷程度較小。但與正常組比較，干酪乳桿菌劑量1組和2組小腸黏膜厚度減少，絨毛的排列也較為凌亂，絨毛尖端有水腫的現(xiàn)象。（3）ELISA結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組DLA濃度顯著升高，而與模型組比較，干酪乳桿菌劑量2組DLA濃度顯著下降（P＜005）。（4）WESTERNBLOTTING結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組緊密連接蛋白OCCLUDIN和ZO1的表達(dá)均顯著下降，而干酪乳桿菌劑量2組均比模型組顯著升高（P＜005）。結(jié)論1干酪乳桿菌對(duì)大鼠乳腺腫瘤的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用。2干酪乳桿菌可調(diào)節(jié)CD4、CD8T細(xì)胞、NK細(xì)胞及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等免疫細(xì)胞分布，改善炎性相關(guān)細(xì)胞因子水平，提高機(jī)體免疫調(diào)節(jié)作用。3干酪乳桿菌可改善腸道菌群的分布，降低血清中DLA濃度、增加腸道緊密連接蛋白OCCLUDIN、ZO1的表達(dá)，提高機(jī)體的腸道屏障功能。

簡(jiǎn)介：目的探討2013版BIRADS分類、單獨(dú)使用不同超聲彈性評(píng)估方法（2013版BIRADS超聲彈性分級(jí)法、彈性應(yīng)變率比值法、面積比值法）以及兩者聯(lián)合的方法在乳腺腫塊良惡性鑒別中的診斷價(jià)值。方法選取98例患者，共計(jì)103個(gè)腫塊，所有腫塊均用常規(guī)超聲和彈性成像兩種方式進(jìn)行檢查，按照2013版BIRADS分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，所有病灶行穿刺活檢術(shù)或手術(shù)切除術(shù)，獲取標(biāo)本送病理診斷，對(duì)照病理結(jié)果構(gòu)建ROC曲線確定兩種彈性評(píng)估方法（SR法和AR法）的最佳診斷截?cái)帱c(diǎn)，用三種不同的彈性評(píng)估方法對(duì)腫塊的性質(zhì)進(jìn)行評(píng)判，再根據(jù)不同的彈性評(píng)估結(jié)果對(duì)BIRADS分類進(jìn)行調(diào)整，比較不同方法之間的差異。結(jié)果1BIRADS分類在進(jìn)行乳腺腫塊良惡性診斷時(shí)的靈敏度是9385％，特異度是9474，準(zhǔn)確度是9417。2彈性分級(jí)法、應(yīng)變率比值法、面積比值法診斷乳腺腫塊良惡性的準(zhǔn)確度分別為7087，8252，8252；靈敏度分別為9024，9091，9091；特異度分別為5806，7292，7292。3BIRADS分類聯(lián)合三種不同彈性評(píng)估方法分級(jí)法、SR法、AR法診斷乳腺腫塊良惡性的準(zhǔn)確度分別為9126，9029，8932；靈敏度分別為9355，9344，9194；特異度分別為878，8571，8537。4構(gòu)建ROC曲線，BIRADS分類、不同彈性評(píng)估方法（分級(jí)法、SR法、AR法）、BIRADS分類聯(lián)合三種不同彈性評(píng)估方法分級(jí)法、SR法、AR法ROC曲線下的面積分別為0952077808430892095109650952。結(jié)論12013版BIRADS分類、單獨(dú)使用不同的彈性成像評(píng)估方法、兩種方法聯(lián)合在乳腺病灶良惡性鑒別中均具有診斷價(jià)值。2單獨(dú)使用不同的彈性成像評(píng)估方法進(jìn)行診斷時(shí)，超聲彈性分級(jí)法有一定的局限性，應(yīng)變率比值法、面積比值法作為一種半定量評(píng)價(jià)方法在一定程度可以避免醫(yī)師的主觀影響比其具有更高的診斷價(jià)值。3二維超聲是診斷的基礎(chǔ)，彈性成像技術(shù)可以作為常規(guī)超聲的補(bǔ)充，為BIRADS分類提供更多的參考信息，提升超聲醫(yī)生的診斷信心，為臨床診療提供更好的服務(wù)。

簡(jiǎn)介：乳腺X線攝影檢查是目前公認(rèn)的早期診斷乳腺癌的有效手段，高品質(zhì)的圖像質(zhì)量是提高乳腺X線攝影的乳腺癌檢出率的前提和保證。采用不同能量的X射線、不同陽極濾過組合進(jìn)行曝光，患者所受到的輻射劑量有明顯不同，所得的圖像質(zhì)量也有所差別。因此，選擇合理的X射線能量、陽極濾過的組合，可在保證圖像質(zhì)量的前提下，降低患者所受的輻射劑量。本研究探討了目前市場(chǎng)上最流行的兩種不同結(jié)構(gòu)類型的平板探測(cè)器的全視野數(shù)字乳腺X線攝影系統(tǒng)，一種是單層非晶硒加薄膜晶體管的平板探測(cè)器，另一種是雙層非晶硒加直接光開關(guān)技術(shù)的平板探測(cè)器，采用不同陽極濾過組合、不同管電壓、管電流等拍攝條件對(duì)RMI156和CDMAM模體進(jìn)行曝光，檢測(cè)所得圖像的纖維條數(shù)、鈣化點(diǎn)、腫塊數(shù)、圖像質(zhì)量因子與輻射劑量，評(píng)價(jià)圖像質(zhì)量、輻射劑量與拍攝條件之間的關(guān)系，研究發(fā)現(xiàn)過分提高管電壓或管電流的值，不能提高顯示鈣化點(diǎn)的能力，卻會(huì)增加患者所受平均腺體劑量AVERAGEGLULARDOSEAGD的值。因此，在拍攝的感興趣對(duì)象為鈣化點(diǎn)時(shí)，可以適當(dāng)降低電壓、電流值，并不會(huì)明顯降低鈣化點(diǎn)的顯示，卻可以降低患者所受的輻射劑量；纖維和腫塊的評(píng)分不與電壓電流成正比，并存在較優(yōu)值；不同陽極濾過組合對(duì)纖維、腫塊、鈣化點(diǎn)的評(píng)分值分布不同，在相同管電壓、管電流條件下，單層非晶硒平板探測(cè)器的成像質(zhì)量高于雙層非晶硒；鎢靶銀濾過組合（記為WAG）的圖像質(zhì)量因子在五組陽極濾過組合中較好；單層非晶硒的鎢靶銠濾過組合（記為WRH）與雙層非晶硒的WRH在整個(gè)過程中輻射劑量相同，但圖像質(zhì)量單層非晶硒的WRH較好。

簡(jiǎn)介：近年來乳腺癌的發(fā)病率越來越高，基于圖像導(dǎo)航微創(chuàng)介入式手術(shù)越來越廣泛應(yīng)用于乳腺癌的診斷和治療。而核磁共振成像技術(shù)對(duì)軟組織的成像特別清晰，具有較精確的導(dǎo)航性能。但核磁共振儀內(nèi)較強(qiáng)的磁場(chǎng)環(huán)境和有限的工作環(huán)境對(duì)乳腺介入機(jī)器人的應(yīng)用提出了較高的要求。因此對(duì)MRI環(huán)境下乳腺介入機(jī)器人的研究具有非常重要的意義。本文設(shè)計(jì)了一款核磁兼容的乳腺介入機(jī)器人，并對(duì)其運(yùn)動(dòng)學(xué)和工作空間進(jìn)行了分析，另外還對(duì)位姿調(diào)整模塊運(yùn)動(dòng)特性和控制性能進(jìn)行了分析。針對(duì)MRI環(huán)境下的乳腺活檢穿刺手術(shù)為例，設(shè)計(jì)了一款核磁兼容的乳腺介入機(jī)器人。首先對(duì)核磁環(huán)境下機(jī)器人材料、結(jié)構(gòu)和驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)的兼容性要求進(jìn)行分析，明確機(jī)器人的限制因素；其次通過對(duì)乳腺活檢手術(shù)的工作過程分析，確定了機(jī)器人各模塊的自由度，并完成機(jī)器人的構(gòu)型設(shè)計(jì)；最后分別對(duì)機(jī)器人的定位裝置、位姿調(diào)整模塊和穿刺模塊進(jìn)行具體設(shè)計(jì)，應(yīng)用CREO20構(gòu)建機(jī)器人的虛擬樣機(jī)。對(duì)乳腺介入機(jī)器人進(jìn)行運(yùn)動(dòng)學(xué)分析，建立相應(yīng)的運(yùn)動(dòng)學(xué)方程；通過理論分析可知，連桿的長(zhǎng)度誤差、機(jī)器人基平臺(tái)的半徑誤差和機(jī)器人動(dòng)平臺(tái)上的夾角誤差是造成機(jī)器人位姿誤差的主要因素，利用仿真分析給出不同條件下三者對(duì)乳腺介入機(jī)器人位姿誤差的影響；利用SIMMECHANICS軟件對(duì)乳腺介入機(jī)器人的工作空間進(jìn)行仿真。建立SIMMECHANICS的運(yùn)動(dòng)學(xué)仿真程序和機(jī)器人仿真機(jī)構(gòu)簡(jiǎn)圖，通過仿真驗(yàn)證了機(jī)器人的工作區(qū)間滿足要求。位姿調(diào)整模塊的運(yùn)動(dòng)是利用雙螺桿的驅(qū)動(dòng)原理來實(shí)現(xiàn)的，每個(gè)關(guān)節(jié)的三個(gè)螺桿均勻的分布在圓周上。所以整個(gè)圓周被分為了三個(gè)區(qū)域，根據(jù)方位角的取值不同，分別推導(dǎo)出關(guān)節(jié)中的每個(gè)螺桿的轉(zhuǎn)數(shù)與機(jī)器人的位姿調(diào)整模塊的參數(shù)彎曲角、方位角以及機(jī)器人位姿調(diào)整模塊的高度變化量S之間的具體函數(shù)關(guān)系表達(dá)式。對(duì)雙螺桿驅(qū)動(dòng)的并聯(lián)關(guān)節(jié)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析建立其動(dòng)力學(xué)模型，并對(duì)雙向控制的穩(wěn)定性進(jìn)行分析，然后對(duì)該模型進(jìn)行了仿真分析，通過仿真分析驗(yàn)證了該方法對(duì)雙螺桿機(jī)構(gòu)有較好的控制效果。對(duì)活檢針進(jìn)行受力分析，根據(jù)組織刺破前后受力的特點(diǎn)，分別對(duì)剛性力、摩擦力和切割力進(jìn)行建模，并且推導(dǎo)出基于優(yōu)化的KARNOPP摩擦模型的活檢針穿刺力數(shù)學(xué)模型和基于DAHL摩擦模型的活檢針穿刺力模型；最后通過實(shí)驗(yàn)對(duì)兩種模型進(jìn)行了驗(yàn)證分析，表明基于DAHL摩擦模型的活檢針穿刺力模型擬合效果較好。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R730密級(jí)公開UDC610編號(hào)2017141051010322014級(jí)攻讀碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文超聲光散射成像對(duì)乳腺腫塊良惡性鑒別診斷的應(yīng)用研究超聲光散射成像對(duì)乳腺腫塊良惡性鑒別診斷的應(yīng)用研究CLINICALAPPLICATIONRESEARCHOFULTRASOUNDWITHDIFFUSEOPTICALIMAGINGSYSTEMINDIFFERENTIATINGMALIGNANTBENIGNBREASTLESION二〇一七年五月指導(dǎo)教師李國(guó)元教授學(xué)生姓名王樹燕學(xué)科專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（腫瘤?。┭芯糠较蚺R床醫(yī)療技能訓(xùn)練與研究學(xué)院系、部青海大學(xué)研究生院I獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期2017年5月31日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)青海大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本論文屬于保密□不保密√（請(qǐng)?jiān)谙鄳?yīng)方框內(nèi)打“√”），在_____年解密后適用本授權(quán)書。學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期2017年5月31日日期2017年5月31日

簡(jiǎn)介：目的他莫昔芬對(duì)ERΑ陽性的乳腺癌患者有良好的治療效果，但是耐藥性的出現(xiàn)限制其效果和應(yīng)用。目前認(rèn)為細(xì)胞自噬可能為導(dǎo)致他莫昔芬耐藥性的關(guān)鍵機(jī)制之一，但此種保護(hù)性自噬形成的具體分子機(jī)制及如何促使他莫昔芬產(chǎn)生耐藥性尚未闡明。藁本內(nèi)酯為當(dāng)歸、川芎中的主要活性成分之一，在目前的研究中，僅有一篇文獻(xiàn)指出藁本內(nèi)酯能調(diào)控TNFΑ誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬，它對(duì)自噬的具體作用并未做探究，且藁本內(nèi)酯能否恢復(fù)耐藥ERΑ陽性乳腺癌細(xì)胞的他莫昔芬敏感性也還未見報(bào)道。本研究擬首先闡明他莫昔芬耐藥性產(chǎn)生過程中保護(hù)性自噬形成的機(jī)制，并且明確保護(hù)性自噬對(duì)DNA損傷修護(hù)機(jī)制的影響，進(jìn)而揭示他莫昔芬耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制。同時(shí)，以藁本內(nèi)酯為研究對(duì)象，對(duì)其抑制自噬及DNA損傷修護(hù)機(jī)制和恢復(fù)耐他莫昔芬的ERΑ陽性乳腺癌細(xì)胞的敏感性進(jìn)行了初步探索。方法采用高濃度短時(shí)間他莫昔芬沖擊法誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的耐藥性。在表征敏感株與耐藥株之間的區(qū)別方面以磺酰羅丹明B法檢測(cè)他莫昔芬對(duì)敏感株和耐藥株細(xì)胞存活率的影響。再以GFPLC3觀察敏感株和耐藥株中基礎(chǔ)自噬水平的差別；采用WESTERNBLOTTING檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)輔以驗(yàn)證。隨后加入自噬抑制劑氯喹探討耐藥株中的自噬是否對(duì)其存活有保護(hù)作用。最后用免疫共沉淀的方法探討耐藥株中自噬水平升高的分子機(jī)制。在考察藁本內(nèi)酯對(duì)細(xì)胞自噬的調(diào)控作用及其分子機(jī)制方面首先RFPLC3和WESTERNBLOTTING檢測(cè)藁本內(nèi)酯對(duì)細(xì)胞自噬的調(diào)控作用；加入氯喹聯(lián)合處理輔以驗(yàn)證。后以TFMRFPGFPLC3質(zhì)粒、GFPLC3RFPLAMP1質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、檢測(cè)組織蛋白酶D的表達(dá)和溶酶體的PH等實(shí)驗(yàn)確定藁本內(nèi)酯調(diào)控自噬的機(jī)制。在考察藁本內(nèi)酯恢復(fù)耐藥乳腺癌細(xì)胞的他莫昔芬敏感性方面首先以磺酰羅丹明B法檢測(cè)藁本內(nèi)酯單獨(dú)或聯(lián)合他莫昔芬對(duì)耐藥乳腺癌細(xì)胞存活率的影響，同時(shí)以克隆形成實(shí)驗(yàn)和HOECHST33342染色輔以驗(yàn)證。再檢測(cè)PARP的表達(dá)以及泛CASPASE抑制劑（ZVADFMK）對(duì)細(xì)胞存活率的恢復(fù)作用，考察藁本內(nèi)酯恢復(fù)他莫昔芬細(xì)胞毒性是否通過CASPASE途徑。在考察DNA損傷及藁本內(nèi)酯是否干擾DNA損傷修復(fù)機(jī)制方面首先考察DNA損傷相關(guān)蛋白的表達(dá)情況，進(jìn)一步地采用SHRNA抑制NUR77的表達(dá)后，考察是否NUR77對(duì)耐藥株DNA損傷水平和細(xì)胞存活率有影響。接下來加入泛素化抑制劑MG132、SIRNA抑制BECLIN1、藁本內(nèi)酯、氯喹處理細(xì)胞，通過WESTERNBLOTTING檢測(cè)NUR77能否被恢復(fù)表達(dá)。最后通過免疫共沉淀和DNA親和沉淀實(shí)驗(yàn)（DAPA）法探討藁本內(nèi)酯如何通過NUR77干擾DNA損傷修復(fù)途徑的機(jī)制。結(jié)果對(duì)比MCF7和T47D細(xì)胞，MCF7TR5和T47DTR5細(xì)胞對(duì)5ΜM的他莫昔芬表現(xiàn)出良好的耐受性。GFPLC3質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，比之MCF7細(xì)胞，MCF7TR5細(xì)胞中觀察到綠色點(diǎn)狀熒光聚集，自噬標(biāo)記物L(fēng)C3III、P62蛋白的表達(dá)下降，且BRCA1、NUR77等蛋白表達(dá)也降低；而通過氯喹抑制自噬后能明顯增強(qiáng)他莫昔芬的細(xì)胞毒性；最后，免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明BECLIN1PI3KC3ATG14復(fù)合物結(jié)合增加。MRFPLC3質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染MCF7TR5細(xì)胞后，藁本內(nèi)酯能明顯增加細(xì)胞內(nèi)紅色點(diǎn)狀熒光聚集；進(jìn)一步的WESTERNBLOTTING結(jié)果表明藁本內(nèi)酯以時(shí)間和劑量依賴性方式增加LC3III和P62的表達(dá)，與氯喹類似。隨后TFMRFPGPFLC3轉(zhuǎn)染MCF7TR5細(xì)胞后，藁本內(nèi)酯和氯喹誘導(dǎo)MCF7TR5細(xì)胞中黃色熒光增加；GFPLC3和RFPLAMP1共同轉(zhuǎn)染MCF7TR5細(xì)胞，藁本內(nèi)酯導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)黃色熒光減少，二者均表明自噬溶酶體融合受阻。進(jìn)一步地實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藁本內(nèi)酯能下調(diào)組織蛋白酶D的表達(dá)，并中和溶酶體PH。藁本內(nèi)酯聯(lián)合他莫昔芬處理耐藥乳腺癌細(xì)胞后，實(shí)驗(yàn)表明聯(lián)合給藥能夠增加耐藥乳腺癌細(xì)胞的凋亡，降低耐藥乳腺癌細(xì)胞存活率及細(xì)胞集落的形成。然而活化的PARP表達(dá)沒有變化；與之相符合的是泛CASPASE抑制劑ZVADFMK也不能恢復(fù)聯(lián)合給藥下調(diào)的細(xì)胞存活率。對(duì)比MCF7細(xì)胞，MCF7TR5細(xì)胞中BRCA1、RAD51表達(dá)下降，表明DNA損傷修復(fù)的同源重組修復(fù)途徑受損，而KU80表達(dá)上升，則DNA損傷修復(fù)的非同源性末端接合機(jī)制啟動(dòng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MCF7TR5細(xì)胞中ΓH2AX的表達(dá)高于MCF7細(xì)胞；隨后對(duì)比單獨(dú)的他莫昔芬，藁本內(nèi)酯聯(lián)合他莫昔芬能上調(diào)細(xì)胞內(nèi)ΓH2AX的表達(dá)。SHRNA法抑制細(xì)胞內(nèi)NUR77的表達(dá)后，聯(lián)合給藥導(dǎo)致的ΓH2AX表達(dá)積累和下調(diào)MCF7TR5細(xì)胞存活率的作用被逆轉(zhuǎn)。隨后，MG132、SIRNA抑制BECLIN1、氯喹和藁本內(nèi)酯分別處理細(xì)胞后，結(jié)果表明只有抑制自噬能夠恢復(fù)NUR77的表達(dá)。接下來，免疫共沉淀法證實(shí)在MCF7TR5細(xì)胞中，NUR77與KU80的相互作用減弱，但藁本內(nèi)酯能夠增強(qiáng)二者的相互作用；最后DNA親和沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)藁本內(nèi)酯能夠抑制KU80和DNAPKCS分別與DNA末端的結(jié)合作用。結(jié)論隨著他莫昔芬的治療，乳腺癌細(xì)胞內(nèi)BECLIN1與BCL2的結(jié)合減弱，釋放出BECLIN1，導(dǎo)致BECLIN1PI3KC3ATG14復(fù)合物結(jié)合增加，自噬水平上升，產(chǎn)生耐藥性促進(jìn)癌細(xì)胞存活。此外，由于BRCA1和RAD51表達(dá)的下降，KU80表達(dá)的升高，MCF7TR5細(xì)胞出現(xiàn)更高的DNA損傷水平。有趣的是，耐藥株中過高的細(xì)胞自噬導(dǎo)致NUR77的表達(dá)降低，使其與KU80形成的復(fù)合物降低，導(dǎo)致非同源重組修復(fù)水平升高。在細(xì)胞自噬方面，藁本內(nèi)酯通過干擾自噬體與溶酶體的融合和影響溶酶體功能抑制自噬。更重要的是，藁本內(nèi)酯抑制自噬恢復(fù)MCF7TR5細(xì)胞中NUR77的表達(dá)，從而促進(jìn)NUR77與KU80的相互作用，導(dǎo)致DNAPKCS和KU80分別與DNA末端的結(jié)合作用受到抑制，干擾DNA損傷修復(fù)，最終增強(qiáng)他莫昔芬的細(xì)胞毒性。本研究不僅對(duì)乳腺癌細(xì)胞中他莫昔芬耐藥性的形成進(jìn)行了深入探討，且證實(shí)藁本內(nèi)酯是一種有效的自噬抑制劑，并且在抗腫瘤的聯(lián)合治療方面可能具有潛在作用。

簡(jiǎn)介：乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，目前尚無有效的預(yù)防措施。隨著乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，乳腺癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷是降低乳腺癌患者死亡率的有效手段。由于近紅外光譜掃描操作方便，成本較低，是乳腺疾病檢測(cè)的重要方法之一，廣泛應(yīng)用于乳腺疾病的普查中。但是得到的近紅外乳腺圖像中，通過肉眼診斷乳腺癌變的成功率并不十分理想，而且需要醫(yī)生有很高的專業(yè)能力。因此，對(duì)近紅外乳腺圖像進(jìn)行處理，以輔助醫(yī)生診斷，并在此基礎(chǔ)上，實(shí)現(xiàn)癌變部位的自動(dòng)分類，具有重大意義。本文的主要研究工作與成果如下1針對(duì)近紅外乳腺圖像提出了基于CANNY算子的加權(quán)引導(dǎo)濾波，對(duì)圖像進(jìn)行預(yù)處理，并與基于方差的加權(quán)引導(dǎo)濾波進(jìn)行了對(duì)比。采用不同的窗口半徑及規(guī)整化因子對(duì)圖像進(jìn)行處理，減小噪聲的同時(shí)又加強(qiáng)了邊緣紋理信息，得到了良好的預(yù)處理效果，驗(yàn)證了本文預(yù)處理算法的優(yōu)越性。2在預(yù)處理的基礎(chǔ)上采用模糊C均值聚類算法對(duì)圖像進(jìn)行分割，詳細(xì)的分析了網(wǎng)絡(luò)初始化的參數(shù)的設(shè)定，不需要任何人工干預(yù)即可進(jìn)行自動(dòng)分割，可以將癌變部位和正常的乳房組織分割開來，得到了良好的分割結(jié)果，可以有效輔助醫(yī)生定位癌變部位。3提出了11層的VGGVISUALGEOMETRYGROUP卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。采用該網(wǎng)絡(luò)對(duì)近紅外乳腺訓(xùn)練圖像進(jìn)行訓(xùn)練學(xué)習(xí)，利用不同尺度的測(cè)試圖像塊進(jìn)行測(cè)試，并進(jìn)行對(duì)比，確定了測(cè)試效果最優(yōu)的圖像塊尺度，得到了良好的分類結(jié)果，分類的準(zhǔn)確率較高。通過與FCM聚類分析算法的結(jié)果進(jìn)行比較，VGG卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)不需要預(yù)先設(shè)定各種參數(shù)，通過不斷的迭代可以尋求最優(yōu)參數(shù)，使得網(wǎng)絡(luò)更加具有魯棒性和優(yōu)越性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)近紅外乳腺圖像采用VGG卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分類，可以得到較好的分類結(jié)果，準(zhǔn)確率達(dá)到了81％。