利用一種簡易的3D共培養(yǎng)體系探究乳腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞在MDA-MB-231細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換中的作用.pdf

1、乳腺癌是威脅女性健康最常見的一種上皮腫瘤。研究表明乳腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF)可以刺激乳腺癌細(xì)胞的侵蝕和轉(zhuǎn)移。然而，由于缺乏合適的模型，CAF對于腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移所起到的作用仍然是不確切的。在這里建立了一種易得的共培養(yǎng)系統(tǒng)，它可以在體外提供一種與體內(nèi)乳腺癌周邊細(xì)胞更相似的細(xì)胞微環(huán)境。這種3D冷凍凝膠共培養(yǎng)系統(tǒng)可以作為觀察乳腺癌細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞相互作用的理想平臺，并且它還可以直接評估CAF在3D共培養(yǎng)條件下對于乳腺癌轉(zhuǎn)移的影響?；谶@種系

2、統(tǒng)發(fā)現(xiàn)CAF可以促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞在體外的EMT和在體內(nèi)的惡化轉(zhuǎn)移。這種簡易的3D共培養(yǎng)體系也許能為研究EMT機制提供一種簡便方法并為抗腫瘤藥物研究提供一個實用的平臺。
　　目的:
　　1.利用甲基化的明膠制作彈性冷凍凝膠，并與人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231及MCF-7細(xì)胞共培養(yǎng)，檢測其表征，以建立適宜乳腺癌細(xì)胞生長的三維支架，并提供更優(yōu)越的平臺來進(jìn)一步研究三維條件下EMT機制對腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。
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3、.利用細(xì)胞與材料構(gòu)建以CAFs為基質(zhì)細(xì)胞層的三維人源性乳腺癌組織，探討體外乳腺癌三維構(gòu)建對乳腺癌細(xì)胞遷移的影響。
　　3.選用裸鼠為實驗對象，比較傳統(tǒng)二維培養(yǎng)條件，以冷凍凝膠為平臺的三維腫瘤模型及復(fù)合CAF細(xì)胞共培養(yǎng)的以冷凍凝膠為平臺的三維腫瘤模型下乳腺癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的遷移情況，初步探討這種簡易的3D共培養(yǎng)體系相比于傳統(tǒng)培養(yǎng)模型的優(yōu)勢，為研究EMT機制提供一種簡便方法并為抗腫瘤藥物研究提供一個實用的平臺。
　　方法:

4、>　　1.利用臨床乳腺癌腫瘤新鮮標(biāo)本分離成纖維細(xì)胞(CAF)
　　2.細(xì)胞培養(yǎng)。購買人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231，一組用于傳統(tǒng)二維培養(yǎng)，一組與cryogel共培養(yǎng)，一組與復(fù)合CAF細(xì)胞基底層的cryogel共培養(yǎng)，構(gòu)建3D腫瘤組織模型。
　　3.體外驗證簡易的3D共培養(yǎng)體系對EMT影響。
　　4.利用BALB/c-nu裸鼠進(jìn)行體內(nèi)實驗進(jìn)一步驗證。
　　5.統(tǒng)計學(xué)分析。統(tǒng)計分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件完成

5、，p＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.成功制備了與細(xì)胞相容性良好的彈性cryogel。
　　2.成功分離并培養(yǎng)了人源性乳腺癌成纖維細(xì)胞(CAF)。
　　3.構(gòu)建了復(fù)合CAF細(xì)胞作為基質(zhì)層的cryogel三維乳腺癌模型。
　　4.該模型可促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞的EMT。
　　5.體內(nèi)實驗表明該模型可促進(jìn)乳腺癌腫瘤的EMT和惡性度增強。
　　結(jié)論:
　　對于3D共培養(yǎng)