Exendin-4對抗巨噬細胞炎癥作用改善體外胰島素抵抗.pdf

1、目的：
　　隨著社會的進步和人類生活水平的提高，肥胖人群的比例越來越大，肥胖引起的相關疾病越來越普遍，引起社會相關的重視。經研究表明，肥胖是發(fā)生T2DM和胰島素抵抗（IR）的重要危險因素之一。回顧性調查發(fā)現(xiàn)，在長期肥胖的人群中，患T2DM比率明顯增加，可以高達普通人群的5倍及以上。從另一個方面看，在T2DM病人中，80％都是肥胖患者。而且發(fā)生肥胖的時間越長，患T2DM的機會就越大。肥胖者容易患有 T2DM，根本原因在于肥胖者體內存

2、在一種特殊的病理狀態(tài)，叫做“胰島素抵抗”。胰島素，一種內分泌激素，是人體內最主要的降血糖物質，人體在進食后吸收大量的糖入血，通過血液循環(huán)運往全身各處，血液中的葡萄糖需要依靠胰島素才能進入細胞，從而被人體利用和儲存，從而使血液中的葡萄糖維持在一個相對穩(wěn)定的范圍內。遺憾的是，在肥胖者的體內，這個搬運葡萄糖的過程出現(xiàn)了很多問題，從而導致細胞對胰島素產生了“抵抗”，敏感性大幅度降低，血液中的葡萄糖很難進入細胞。早期肥胖者的胰島素分泌還算正常，但

3、是由于IR的存在，胰島素的作用效率大大下降了，為了克服這種抵抗，胰腺就會大量的分泌胰島素，從而使肥胖者血液中的胰島素濃度大大增加，發(fā)生所謂的“高胰島素血癥”。肥胖患者早期還可以通過血液中的高胰島素來控制血糖的水平，但隨后因為過負荷的工作，胰腺合成胰島素的功能會逐漸衰竭，胰島素的生產漸漸不能維持血糖的正常范圍，于是出現(xiàn)了 T2DM。所以肥胖是很容易造成胰島素抵抗和糖尿病的。在過去十年里，越來越多的研究認為肥胖和2型糖尿病都是慢性促炎癥性疾

4、病，認為肥胖、2型糖尿病和慢性炎癥這三者之間關系密切，而巨噬細胞在整個病理發(fā)生發(fā)展過程中起到了至關重要的作用。巨噬細胞浸潤脂肪組織是脂肪組織炎癥發(fā)生的起始，而經研究證實，T2DM常用藥物 GLP-1具有抗炎作用。通過熒光定位和靶向實驗，人們發(fā)現(xiàn)在巨噬細胞上存在GLP-1相關受體，介導GLP-1發(fā)揮作用。
　　方法：
　?、磐ㄟ^轉染GLP-1R的siRNA，抑制小鼠巨噬細胞RAW264和小鼠腹腔巨噬細胞表面的GLP-1R表達，

5、同時轉染錯義序列組siRNA做陰性對照組，并通過qPCR和WB檢驗轉染是否成功；⑵Transwell試驗，是通過應用不同孔徑和經過不同處理的聚碳酸酯膜，進行共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。在本次研究中，主要用Transwell試驗測定巨噬細胞在LPS，exendin-4或兩者作用下的遷移；⑶用ELISA定性定量檢測巨噬細胞在無血清培養(yǎng)基中處理過夜，或含LPS無血清培養(yǎng)基有或無 exendin-4處理后，分泌TNF-

6、α, IL-6和 IL-1β的改變，用WB檢測處理后巨噬細胞中NF-κB相關蛋白的變化；⑷應用3H的放射性檢測3T3-L1s脂肪細胞經過無(對照組)或 CM, CM-LPS, or CM-LPS-Ex4處理后，胰島素刺激的葡萄糖攝取量。
　　結果：
　?、貵LP-1R的siRNA能夠抑制巨噬細胞表面GLP-1R表達，從而使得GLP-1不能對巨噬細胞產生作用；②Exendin-4通過GLP-1R發(fā)揮作用，通過影響巨噬細胞NF-

7、κB活化，抑制細胞炎癥反應，減少LPS導致的巨噬細胞炎性細胞因子的分泌；③Exendin-4可以抑制巨噬細胞的遷移；④Exendin-4通過抑制巨噬細胞炎癥反應增加胰島素依賴的葡萄糖攝取量；
　　結論：
　　GLP-1受體激動劑(exendin-4)不僅可以減少巨噬細胞的遷移，減少炎性浸潤，還可以通過影響NF-κB通路的失活抑制巨噬細胞分泌炎性細胞因子，如TNF-β、IL-6和IL-1β，從而改善巨噬細胞炎癥誘導的胰島素抵抗