Exendin-4對(duì)誘導(dǎo)大鼠胰腺導(dǎo)管來源干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞定向分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 近年來,胰腺干細(xì)胞的研究取得了一定進(jìn)展,目前已成功將胰腺導(dǎo)管和胰島來源的干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為葡萄糖反應(yīng)性胰島素分泌細(xì)胞。但這些細(xì)胞在胰島素的合成和釋放能力以及對(duì)葡萄糖刺激的反應(yīng)能力等方面,均明顯弱于正常的胰島細(xì)胞,尚難滿足臨床細(xì)胞替代治療的要求。故對(duì)胰腺干細(xì)胞本質(zhì)的深入理解、鑒定體系的建立與完善,以及向胰島細(xì)胞定向誘導(dǎo)培養(yǎng)方法的不斷改進(jìn),將是決定胰腺干細(xì)胞應(yīng)用前景的關(guān)鍵。本研究以大鼠胰腺導(dǎo)管來源干細(xì)胞(PDSC)為研究

2、對(duì)象,在適宜的體外培養(yǎng)條件下從胰腺導(dǎo)管中分離純化干細(xì)胞,研究Exendin-4對(duì)誘導(dǎo)大鼠胰腺導(dǎo)管來源干細(xì)胞(PDSC)向胰島素分泌細(xì)胞定向分化的作用。
　　 方法：
　　 對(duì)大鼠胰腺導(dǎo)管來源干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞定向分化培養(yǎng)前進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組,實(shí)驗(yàn)分為四組,對(duì)照組:在誘導(dǎo)培養(yǎng)過程中不添加Exendin-4;實(shí)驗(yàn)一組:在誘導(dǎo)培養(yǎng)第一周添加Exendin-4;實(shí)驗(yàn)二組:在誘導(dǎo)培養(yǎng)第二周添加Exendin-4;實(shí)驗(yàn)三組:在誘導(dǎo)培養(yǎng)

3、全程添加Exendin-4。進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)并光鏡觀察誘導(dǎo)產(chǎn)物,誘導(dǎo)培養(yǎng)后分別在低糖及高糖培養(yǎng)基下孵育,收集上清液,測(cè)定胰島素水平。
　　 結(jié)果：
　　 經(jīng)無血清誘導(dǎo)培養(yǎng)2周左右,PDSC可定向分化為胰島樣細(xì)胞團(tuán)(islet-like cellcluster,ICC)。形態(tài)學(xué)方面,ICC直徑50～350μm,分化后期脫壁呈懸浮生長。表達(dá)特性方面,DTZ染色結(jié)果顯示,ICC內(nèi)含有胰島素陽性細(xì)胞,提示ICC在蛋白分子水平表達(dá)胰島

4、素。無論在低糖環(huán)境下,還是高糖環(huán)境下,后期添加組(誘導(dǎo)培養(yǎng)第2周添加Exendin-4)的胰島素水平均明顯高于對(duì)照組(誘導(dǎo)培養(yǎng)全程不添加Exendin-4)(P＜0.01)和前期添加組(誘導(dǎo)培養(yǎng)第1周添加Exendin-4)(P＜0.01),而與全程添加組(誘導(dǎo)培養(yǎng)全程添加Exendin-4)無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：Exendin-4的后期應(yīng)用促進(jìn)了PDSC的功能分化,即Exendin-4可促進(jìn)PDSC的后期