丙酮醛聯(lián)合乙二醛酶I低表達介導STAT1信號通路協(xié)同抑制結直腸癌的生長.pdf

1、目的：
　　丙酮醛（Methylglyoxal, MG）是糖酵解過程中產生的具有極高生物活性的二羰基化合物，其具有抗腫瘤活性。乙二醛酶I（Glyoxalase I, GLOI）是MG代謝過程中的關鍵酶，參與腫瘤的發(fā)展。GLOI在多種類型的腫瘤組織中的表達量明顯高于正常組織。MG或 GLOI在多種腫瘤中的作用已經被證實，但 MG聯(lián)合GLOI低表達在結直腸癌中的作用尚不清楚。本實驗擬從體內外探究 MG聯(lián)合GLOI低表達在結直腸癌中的作

2、用以及其潛在的作用機制。
　　實驗方法：
　　本實驗中我們首先建立GLOI穩(wěn)定低表達的結直腸癌細胞系。然后利用不同濃度的MG（0.4 mmol/L、0.8 mmol/L）處理對照組和GLOI低表達組的四種結直腸癌細胞（DLD-1細胞、HCT-15細胞、SW480細胞及 SW620細胞）。利用CCK-8實驗和平板克隆形成實驗檢測四種結直腸癌的細胞活力和克隆形成能力；利用 Transwell小室實驗檢測結直腸癌細胞的遷移和侵襲的

3、變化情況；利用Annexin V-APC、PI熒光雙染法和流式細胞儀檢測結腸癌細胞凋亡的變化情況；利用Western blot檢測GLOI及STAT1信號通路相關蛋白的變化情況；利用q-PCR和GLOI酶活性檢測試劑盒（Quanti ChromTMGlyoxalase I Assay Kit）分別檢測GLOI的mRNA和酶活性的變化情況。我們通過建立裸鼠人結直腸癌細胞SW620皮下移植瘤模型研究 MG和 GLOI低表達在體內對結直腸癌的

4、影響，利用 MG酶聯(lián)免疫試劑盒檢測細胞內 MG和裸鼠外周血中的MG的含量，利用免疫組化實驗檢測腫瘤組織中STAT1蛋白的變化情況。
　　實驗結果：
　　成功構建GLOI低表達結直腸癌細胞株。與對照組相比，MG聯(lián)合GLOI低表達協(xié)同抑制結直腸細胞的增殖、平板克隆形成、遷移、侵襲能力并能協(xié)同誘導結直腸細胞凋亡。MG和GLOI低表達單獨或者聯(lián)合后能上調STAT1和Bax蛋白水平，下調Bcl-2蛋白水平。進一步研究表明，MG和GLO