小鼠乳腺管腔祖細(xì)胞形成的不同形態(tài)3D結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、研究背景:人類乳腺癌有五種分子亞型，分別是Luminal A、Luminal B、claudinlow，basal-like以及Her2。目前乳腺癌的起始細(xì)胞研究顯示不同亞型的乳腺癌具有不同的起始細(xì)胞，并且多種亞型的乳腺癌起始于管腔祖細(xì)胞。因此，研究管腔祖細(xì)胞的階級(jí)性質(zhì)，對(duì)了解乳腺癌的細(xì)胞背景具有重要意義。目前關(guān)于乳腺管腔細(xì)胞系的研究顯示它是一個(gè)異質(zhì)性的群體，至少有三種亞群的細(xì)胞構(gòu)成:NCL細(xì)胞、ER+管腔祖細(xì)胞、ER-管腔祖細(xì)胞，但這

2、些亞群細(xì)胞的階級(jí)關(guān)系尚不明確。
　　研究方法:本研究聚焦于流式分選的小鼠乳腺管腔祖細(xì)胞在基底膜基質(zhì)（Matrigel）中分化培養(yǎng)形成的3D結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要分為兩部分:第一部分是不同形成條件（微球3D、細(xì)胞3D、饑餓微球3D、不同培養(yǎng)時(shí)間微球3D）對(duì)管腔祖細(xì)胞形成的各種形態(tài)3D的影響;第二部分研究不同形態(tài)的3D再生能力，包括體外3D傳代實(shí)驗(yàn)以及體內(nèi)移植再生實(shí)驗(yàn)。
　　研究結(jié)果:本研究第一部分的結(jié)果顯示，經(jīng)流式分選的管腔祖細(xì)胞

3、以及其形成的微球在基底膜基質(zhì)中主要形成三種形態(tài)的3D，分別是:空心的(Hollow)、半空心的(Half hollow)以及實(shí)心的(Solid-like)，并且Solid-like3D與干細(xì)胞形成的Solid3D是不同的。并且研究顯示微球3D的形成個(gè)數(shù)均要明顯的低于細(xì)胞3D。另外，微球饑餓處理形成空心微球(Hollow sphere)，Hollow sphere與Solidsphere相比Hollow3D和Solid-like3D形成率

4、升高，但Half hollow相對(duì)降低。微球3D培養(yǎng)5天、9天、21天，發(fā)現(xiàn)5天3D出現(xiàn)許多的Solid-like3D，但培養(yǎng)到9天時(shí)其數(shù)目會(huì)明顯的減少，培養(yǎng)21天時(shí)3D形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的許多3D中間出現(xiàn)一層細(xì)胞并且與干細(xì)胞形成的3D結(jié)構(gòu)相似。此外，免疫組化的結(jié)果顯示K8、K18、ER等管腔祖細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低，而K14、SMA等干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)卻有上升的趨勢(shì)，增殖性標(biāo)志物Ki67的表達(dá)也有上升趨勢(shì)。第二部分

5、結(jié)果顯示，在傳代實(shí)驗(yàn)中5天3D中Half hollow和Solid-like結(jié)構(gòu)傳代能力要明顯的高于Hollow，并且21天的3D的傳代能力與5天3D的傳代并無(wú)明顯差別;3D移植實(shí)驗(yàn)顯示在移植10個(gè)不同形態(tài)的3D時(shí)再生能力由Hollow、Half hollow、Solid-like依次降低，但單個(gè)移植時(shí)solid-like的再生能力要強(qiáng)于Hollow、Half hollow，并且β-casain的染色結(jié)果顯示再生乳腺在妊娠期均具有產(chǎn)生乳

6、汁的能力。
　　研究結(jié)論:乳腺管腔祖細(xì)胞形成的三種不同3D結(jié)構(gòu)，分別是Hollow、Half hollow以及Solid like。管腔祖細(xì)胞Solid like3D的形成能力要高于干細(xì)胞Solid3D，并且在移植實(shí)驗(yàn)中三種形態(tài)的3D具有不同的再生能力，這些結(jié)果顯示管腔祖細(xì)胞形成的3種形態(tài)的3D代表這三種不同亞型管腔祖細(xì)胞。此外，5天、9天、21天3D免疫組化結(jié)果顯示隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)3D結(jié)構(gòu)發(fā)生的去分化。再者5天3D體外傳代實(shí)驗(yàn)