新型香豆素類化合物對MCF-7乳腺癌細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：在全球范圍內，乳腺癌是女性發(fā)病率最高的癌癥并位居女性癌癥死因首位。作為一種激素依賴性的全身性疾病，目前提倡針對乳腺癌采取手術，放、化療，內分泌治療和分子靶向治療的綜合治療手段，其中以他莫昔芬（TAM）為代表的抗雌激素藥物是目前最常用的乳腺癌內分泌治療藥物。然而，在進行TAM治療的過程中，往往會發(fā)生耐藥現象，這也成為制約乳腺癌內分泌治療成功的主要障礙。為了提高TAM的療效，一些實驗室對其結構進行了改造，合成了與其結構類似的新型香豆素

2、類化合物，在前期的研究中發(fā)現，該類化合物對包括乳腺癌細胞在內的多種腫瘤細胞有很強的抗增殖能力且對正常細胞的細胞毒性較低，但其作用的具體機制有待進一步研究。本課題通過采用CellTiter96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay Kit（MTS法）、流式細胞術PI染色法、Western blot法及實時定量PCR法（RT-PCR法）檢測新型香豆素類化合物對MCF-7乳腺癌細胞增殖和凋

3、亡的影響，旨在為新型抗腫瘤藥物的研發(fā)提供理論依據及實驗基礎。
　　方法：常規(guī)培養(yǎng)MCF-7人乳腺癌細胞，取對數生長期的MCF-7細胞用于實驗。
　　1、MTS法檢測不同濃度（0、5、10、15、20μmol/L）的TAM和新型香豆素類化合物作用細胞48h后對增殖的影響，計算并比較兩種化合物對MCF-7細胞的半數抑制濃度（IC50）；
　　2、流式細胞術PI染色法檢測IC50濃度的TAM和新型香豆素類化合物對細胞周期的影

4、響；
　　3、Western blot法和RT-PCR法分別檢測兩種化合物在各自IC50濃度時作用于MCF-7細胞48h后對Cyclin D1、NF-κB(P65)、p-NF-κB(P65)、Bcl-2、Bax蛋白及其mRNA表達情況的影響。
　　所有實驗數據均以均數±標準差（-X±s）表示，并應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行后續(xù)處理，均數比較采用t檢驗或方差分析（ANOVA S-N-K）檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學

5、意義。
　　結果：
　　1、MTS法結果顯示，分別以不同濃度（0、5、10、15、20μmol/L）的TAM和新型香豆素類化合物培養(yǎng)MCF-7細胞48h后，細胞的增殖均受到抑制，且隨藥物濃度增大抑制作用增強；依據MTS結果得到TAM和新型香豆素類化合物對人乳腺癌MCF-7細胞的IC50值分別為13.72±1.85μmol/L和7.18±1.39μmol/L。
　　2、流式細胞術結果顯示TAM和新型香豆素類化合物均可以使

6、G1期細胞增加，S期及G2期細胞減少，且細胞對照組、TAM和新型香豆素類化合物三組之間相比差異具有統(tǒng)計學意義（P值均小于0.05）。
　　3、Western blot和RT-PCR的結果分別提示，在蛋白及mRNA水平，兩種化合物均可以使CyclinD1、NF-κB(P65)、p-NF-κB(P65)及Bcl-2的表達下調并可以上調Bax的表達，且新型香豆素類化合物的作用>TAM>細胞對照組（P值均小于0.05）。
　　結論：