大鼠同種異體角膜移植排斥反應動物模型的建立及NK細胞在角膜排斥反應中作用的研究.pdf

1、角膜疾病是眼科臨床工作中最常見的疾病之一,其致盲率在我國盲目流行病學調(diào)查中排名第二,僅次于白內(nèi)障。且角膜損傷的瘢痕修復及角膜內(nèi)皮細胞的不可再生性都嚴重影響角膜病的治療和預后,因此,對于治療角膜盲,角膜移植是臨床上唯一可靠、有效的復明手段,與其他臟器移植比較。角膜移植有明顯的免疫學特點即免疫特惠,盡管如此,隨著現(xiàn)代顯微手術(shù)和角膜保存技術(shù)的發(fā)展,移植術(shù)后的免疫排斥反應已成為角膜移植失敗的主要因為。所以,建立合適的角膜移植動物模型,對進一步模

2、擬人的角膜移植排斥反應,進行更加深入的基礎(chǔ)研究具有非常重要的意義。
　　 角膜移植排斥反應的機制是多種免疫細胞和免疫分子參與的復雜的免疫反應過程,有效地防治角膜移植術(shù)后免疫排斥反應的發(fā)生是降低角膜移植排斥率的實際問題,大量研究依據(jù)輔助T淋巴細胞(helpert lymphocte,Th1/Th2)學說探討各類免疫細胞及細胞因子參與角膜移植排斥反應的調(diào)控機制,現(xiàn)今的研究和臨床藥物大多數(shù)針對T淋巴細胞系統(tǒng),而近來實驗證明剔除T淋巴細

3、胞的動物角膜移植模型,仍然會發(fā)生排斥反應。自然殺傷細胞(Nature Killed Cell,NK細胞)是一類獨立的淋巴細胞群,有報道提出NK細胞具有對異體抗原的識別,然后釋放細胞因子來激活不同的效應細胞的作用,而國內(nèi)關(guān)于NK細胞在角膜移植排斥反應中作用的研究尚未有相關(guān)報道。
　　 研究目的:
　　 建立大鼠同種異體角膜移植模型,觀察角膜排斥反應的臨床表現(xiàn)及進行排斥反應的病理學研究,分析手術(shù)中注意事項及操作技巧、術(shù)后并發(fā)

4、癥的因為及對策,提高大鼠角膜移植模型的成功率。初步研究NK細胞在大鼠同種異體角膜移植排斥反應中的作用。
　　 主要方法:
　　 1.大鼠同種異體穿透性角膜移植動物模型的建立
　　 1.1實驗組:Wistar雌性大鼠40只,SD(Sprague-Dawley)雌性大鼠40只,用直徑3.5mm的環(huán)鉆鉆取SD大鼠右眼角膜,作為同種異體角膜移植植片,用直徑3.0mm的環(huán)鉆鉆取Wistar大鼠右眼角膜作為植床,用10-0尼

5、龍線將角膜植片間斷縫合于角膜植床上,為同種異體角膜移植組。
　　 1.2對照組:Wistar雌性大鼠40只,用3.0mm環(huán)鉆鉆取右眼角膜,于12:00位做標記,旋轉(zhuǎn)180°后,用10-0尼龍線原位間斷縫合于植床上,為同體角膜移植對照組。1.3術(shù)后觀察:觀察術(shù)后角膜移植排斥反應發(fā)生的進程,于術(shù)后不同時間對實驗組及對照組大鼠角膜植片情況進行排斥反應評分。
　　 2.大鼠同種異體角膜移植排斥反應發(fā)生的病理學研究及并發(fā)癥的分析<

6、br>　　 實驗組及對照組分別于PO6、PO8、PO12、PO24、PO45各取4只術(shù)眼眼球,10％甲醛固定,石蠟包埋,HE染色。觀察隨著排斥反應的發(fā)生發(fā)展,角膜植片可出現(xiàn)基質(zhì)細胞浸潤,植片厚度,植片新生血管,植片內(nèi)皮細胞數(shù)目等方面變化。觀察記錄和總結(jié)術(shù)中術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生和預防方法。
　　 3.自然殺傷細胞在大鼠同種異體角膜移植排斥反應中作用的研究
　　 分別于PO2、PO4、PO6、PO8、PO10、PO12等不同時

7、間點,取實驗組及對照組大鼠外周血,應用CD3-CD161+的NK細胞特異性抗體標記外周血內(nèi)NK細胞,行流式細胞儀計數(shù),分析NK細胞術(shù)后不同時間在淋巴細胞中所占比例的變化。實驗結(jié)果
　　 1.SD大鼠與Wistar大鼠間同種異體角膜移植組與Wistar大鼠自體角膜移植組之間角膜排斥反應指數(shù)(Rejection Value RV值)存在明顯差異,實驗組排斥反應發(fā)生率為100％,異體移植片存活時間為(9.65±0.77)天。
　

8、　 2.同種異體角膜移植組與自體角膜移植組大鼠植片病理切片中,在角膜植片基質(zhì)浸潤、植片厚度、新生血管等方面存在顯著差異,兩組共80例動物模型中術(shù)后出現(xiàn)虹膜前粘連6例,白內(nèi)障4例,眼內(nèi)感染3例,虹膜脫出3例。
　　 3.同種異體角膜移植組術(shù)后早期大鼠外周血中NK細胞占淋巴細胞比例明顯高于對照組,結(jié)果有顯著差異,NK細胞計數(shù)峰值出現(xiàn)在術(shù)后第(4.4±0.82)天。
　　 結(jié)論：
　　 1.大鼠角膜主要組織相容性抗原