中藥提取物對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖及蛋白含量的影響.pdf

1、本研究通過(guò)培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞，并以該細(xì)胞為研究對(duì)象，研究中藥復(fù)方透皮貼劑和中藥復(fù)方灌注液對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖、總蛋白含量以及β-酪蛋白含量的影響。從奶牛乳房無(wú)菌采取乳腺組織，通過(guò)體外原代培養(yǎng)、分離純化以及傳代等方法建立穩(wěn)定的奶牛乳腺上皮細(xì)胞系。倒置顯微鏡下對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行觀察，做形態(tài)學(xué)鑒定；繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；通過(guò)SDS-PAGE電泳鑒定奶牛乳腺上皮細(xì)胞所分泌的β-酪蛋白。制備中藥復(fù)方透皮貼劑及其主要成分的單味中藥提取物和中藥復(fù)

2、方灌注液及其主要成分的單味中藥提取物，添加到奶牛乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)液中，研究其對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖、總蛋白以及β-酪蛋白含量的影響。
　　試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　本試驗(yàn)中，通過(guò)組織塊培養(yǎng)法可獲得奶牛乳腺細(xì)胞，通過(guò)胰蛋白酶多次消化的方法可基本去除奶牛乳腺細(xì)胞中的成纖維細(xì)胞，獲得較為純化的奶牛乳腺上皮細(xì)胞；經(jīng)過(guò)傳代以后，奶牛乳腺上皮細(xì)胞的形態(tài)以及生理功能不發(fā)生改變，從而建立了穩(wěn)定的奶牛乳腺上皮細(xì)胞系。
　　采用不同濃度的中藥復(fù)

3、方灌注液及其單味中藥的提取液處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞1d后，在濃度為10 mg?mL-1時(shí)OD值最大，但促進(jìn)細(xì)胞增殖的效果不顯著（P>0.05）。采用10 mg?mL-1的中藥提取物處理乳腺上皮細(xì)胞6 d，與對(duì)照組相比，紫花地丁和黃芪對(duì)乳腺上皮細(xì)胞增殖作用不明顯（P>0.05）；澤蘭和雞血藤在第3 d時(shí)即能極顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖（P<0.01)，而中藥灌注液在第5 d時(shí)能極顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖（P<0.01)。
　　采用不同濃度的中藥復(fù)方灌注

4、液及其單味中藥的提取液處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞1 d后，在濃度為15 mg?mL-1時(shí)細(xì)胞總蛋白含量最大。15 mg?mL-1的中藥提取物處理乳腺上皮細(xì)胞6 d，與對(duì)照組相比，紫花地丁提取物對(duì)細(xì)胞總蛋白含量無(wú)顯著影響（P>0.05）；澤蘭、雞血藤提取物和復(fù)方灌注液在第1 d時(shí)對(duì)細(xì)胞總蛋白含量有顯著影響，且隨時(shí)間延長(zhǎng)總蛋白含量增加，差異極顯著（P<0.01）；訶子提取物在第1 d時(shí)極顯著促進(jìn)細(xì)胞分泌總蛋白（P<0.01），第3 d與第1 d總

5、蛋白含量相比，極顯著下降（P<0.01），第5 d同第3 d相比，細(xì)胞總蛋白含量極顯著增加（P<0.01）。
　　采用不同濃度的中藥復(fù)方灌注液及其單味中藥的提取液處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞1 d后，在濃度為10 mg?mL-1時(shí)β-酪蛋白含量最大。10 mg?mL-1的中藥提取物處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞6 d，與對(duì)照組相比，在第1 d時(shí)，紫花地丁、黃芪、澤蘭、訶子以及復(fù)方灌注液組能夠極顯著促進(jìn)細(xì)胞β-酪蛋白的分泌（P<0.01），雞血藤能夠

6、顯著促進(jìn)β-酪蛋白的分泌（0.010.05）；第5 d與第3 d相比，灌注液組差異極顯著（P<0.01），黃芪、澤蘭、訶子組差異顯著（0.010.05）。
　　采用不同濃度的中藥復(fù)方透皮貼劑及其單味中藥的提取液處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞1 d后，在濃度為10 mg?mL-1時(shí)OD值最大，但促進(jìn)細(xì)胞增殖的效

7、果不顯著（P>0.05）。10 mg?mL-1的中藥提取物處理乳腺上皮細(xì)胞6 d，與對(duì)照組相比，重樓組在第5 d能夠顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖（0.010.05）。
　　采用不同濃度的中藥復(fù)方透皮貼劑及其單味中藥的提取液處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞1 d后，在濃度為10 mg?mL-1時(shí)總蛋白含量最大。10 mg?mL-

8、1的中藥提取物處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞6 d，與對(duì)照組相比，重樓組在第5 d能夠極顯著促進(jìn)細(xì)胞β-酪蛋白分泌（P<0.01），黃連組、馬蘭組、透皮貼劑組在第1 d時(shí)就能夠極顯著提高細(xì)胞β-酪蛋白含量（P<0.01），木芙蓉組在第3 d能夠極顯著提高細(xì)胞β-酪蛋白含量（P<0.01）。
　　采用不同濃度的中藥復(fù)方透皮貼劑及其單味中藥的提取液處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞1 d后，在濃度為10 mg?mL-1時(shí)β-酪蛋白含量最大，但促進(jìn)作用不顯著（

9、P>0.05）。10 mg?mL-1的中藥提取物處理乳腺上皮細(xì)胞6 d，與對(duì)照組相比，在第1d時(shí)，重樓組、木芙蓉組和透皮貼劑組β-酪蛋白含量有所增加，但差異不顯著（P>0.05）。第3 d和第1 d相比，β-酪蛋白含量增加，差異極顯著（P<0.01）；第5 d和第3 d相比，β-酪蛋白含量增加，差異極顯著（P<0.01）。黃連組、馬蘭組β-酪蛋白含量變化不明顯（P>0.05）。
　　試驗(yàn)證實(shí)，采用適宜濃度的中藥提取物處理奶牛乳腺上