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文檔簡介
1、目的：探討體外過表達(dá)microRNA-30c(miR-30c)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa及HEC-1-B細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響及其作用機(jī)制。
方法：設(shè)計并構(gòu)建能在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)成熟miR-30c的表達(dá)質(zhì)粒載體pRNAT-CMV3.2-Neo-miR-30c，以及陰性對照質(zhì)粒pRNAT-CMV3.2-Neo-miR-N，轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌Ishikawa及HEC-1-B細(xì)胞株，real-time PCR檢測細(xì)胞內(nèi)成熟miR-3
2、0c表達(dá)情況。MTT比色法檢測細(xì)胞的增殖，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡，人工重組基底膜侵襲小室(Transwell)觀察細(xì)胞的侵襲能力。Real-time PCR檢測腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因-1(MTA1)mRNA表達(dá)量，Western Blot檢測MTA13蛋白表達(dá)量。設(shè)計并構(gòu)建含有miR-30c與MTA1的3'非編碼區(qū)(3'UTR)可能作用位點(diǎn)序列的PGL3-MTA1-3'UTR及相應(yīng)陰性對照熒光素酶報告基因載體，并與miR-30c表達(dá)質(zhì)粒載體共
3、轉(zhuǎn)染細(xì)胞，檢測其熒光素酶活性。
結(jié)果：成功構(gòu)建pRNAT-CMV3.2-Neo-miR-30c表達(dá)質(zhì)粒載體并轉(zhuǎn)染Ishikawa及HEC-1-B細(xì)胞，Real-time PCR證實轉(zhuǎn)染質(zhì)粒表達(dá)成熟miR-30c有效。轉(zhuǎn)染pRNAT-CMV3.2-Neo-miR-30c表達(dá)質(zhì)粒載體的細(xì)胞增殖能力減低，侵襲能力減弱，但凋亡率沒有明顯改變。過表達(dá)miR-30c細(xì)胞MTA1的mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)量均降低。成功構(gòu)建熒光素酶報告基因載
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