CXCR4-CXCL12軸與早期宮頸癌（FIGO ⅠB1～ⅡA）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分 CXCR4/CXCL12在宮頸癌細(xì)胞的表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及宮頸慢性炎癥相關(guān)性。 目的：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否是影響宮頸癌預(yù)后的重要因素之一，本研究旨在探討CXCR4、CXCL12蛋白在宮頸癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)相關(guān)性、與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及宮頸間質(zhì)慢性炎癥浸潤(rùn)的相關(guān)性。 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)35例宮頸腺癌、89例宮頸鱗癌組織標(biāo)本癌細(xì)胞及20例正常宮頸組織中CXCR4、CXCL12蛋白的表達(dá)，所有病例根據(jù)淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移分組。

2、淋巴結(jié)陽(yáng)性組28例，淋巴結(jié)陰性組96例。90﹪以上腫瘤細(xì)胞強(qiáng)著色定義為過(guò)表達(dá)。采用Fisher’s精確概率檢驗(yàn)法、卡方檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)及PearSon相關(guān)檢驗(yàn)分析結(jié)果。 結(jié)果： ①宮頸癌細(xì)胞CXCR4表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移89例宮頸鱗癌中均有不同數(shù)量腫瘤細(xì)胞表達(dá)不同強(qiáng)度的CxCR4，陽(yáng)性表達(dá)率100﹪(89/89)，過(guò)表達(dá)率44.94﹪(40/89)。胞膜、胞漿著色，未見(jiàn)胞核著色。 ②宮頸癌細(xì)胞CXCL12表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

3、移及分期CXCL12在宮頸鱗癌細(xì)胞胞膜和胞漿表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率100﹪(89/89)，過(guò)表達(dá)率23.60﹪(21/89)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CXCL12過(guò)表達(dá)率(20.00﹪，4/20)低于淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組(24.64﹪，17/69)，p=0.460。 ③宮頸癌細(xì)胞CXCR4/CxCL12表達(dá)的相關(guān)性在宮頸鱗癌，臨床ⅠB期且無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，CXCR4表達(dá)得分與CXCL12表達(dá)得分間呈正相關(guān)(P=0.029)。所有病例合并后分析，CXCR4

4、與CXCL12表達(dá)具相關(guān)性(P=0.002)。 結(jié)論: 1. 宮頸腺癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)CXCR4與盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與宮頸鱗癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不相關(guān)。 2. 宮頸癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)CXCL12與宮頸腺癌、鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)關(guān)卻隨宮頸腺癌臨床分期升高而升高。 3. CXCR4-CXCL12在宮頸鱗癌及早期腺癌中的表達(dá)呈正相關(guān)。 4． CXCL12在宮頸原發(fā)灶的表達(dá)與鱗癌宮頸間質(zhì)炎性浸潤(rùn)不相關(guān)，卻與腺癌宮頸間質(zhì)淋

5、巴細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)。 第二部分宮頸癌細(xì)胞CxCL12、CXCR4表達(dá)與宮頸癌細(xì)胞增殖及血清SCC水平相關(guān)性研究。 目的：探討CXCL12/CXCR4與宮頸癌細(xì)胞增殖及宮頸癌病人血清SCC水平相關(guān)性。 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)70例宮頸癌組織標(biāo)本中癌細(xì)胞CXCR4、CXCLl2蛋白及Ki-67抗原的表達(dá)。應(yīng)用放射免疫法檢測(cè)病人血清SCC水平。 結(jié)果： ① CXCR4、CXCL12、Ki-67在宮頸癌

6、組織中的表達(dá)及宮頸癌病人血清SCC水平70例病例中均有不同數(shù)量腫瘤細(xì)胞表達(dá)不同強(qiáng)度的CXCR4、CXCL12，陽(yáng)性表達(dá)率分別為97.14﹪(68/70)、98.57﹪(69/70)。均為胞膜、胞漿著色，未見(jiàn)胞核著色。 Ki-67指數(shù)在70例宮頸癌組織中高低不一，26.41±24.945(mean±SD)(范圍：2～95)，胞核染色。 血清SCC水平在70例病例高低不一，1.354±2.95643(mean+SD)(范圍：0.00

7、ng/ml～23.60ng/ml)，陽(yáng)性率為87.14﹪(61/70)。 ②宮頸癌細(xì)胞CXCR4、CXCL12表達(dá)與Ki-67指數(shù)及血清SCC水平相關(guān)性Ki-67指數(shù)與宮頸癌細(xì)胞CXCL12表達(dá)呈正相關(guān)，卻與CXCR4表達(dá)無(wú)相關(guān)性。宮頸癌細(xì)胞CXCL12、CXCR4表達(dá)與病人血清SCC水平均無(wú)相關(guān)性。 結(jié)論: 1.宮頸癌細(xì)胞自分泌CXCL12可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖。 2.宮頸癌細(xì)胞表達(dá)CXCR4與宮頸癌細(xì)胞

8、增殖程度不相關(guān)。 第三部分 CXCR4/CXCL12相互作用對(duì)宮頸癌細(xì)胞株運(yùn)動(dòng)、粘附、侵襲能力的影響。 目的：檢測(cè)CXCR4、CXCL12蛋白在宮頸腺癌、鱗癌細(xì)胞株的表達(dá)。觀(guān)察CXCR4-CXCL12互相作用對(duì)體外培養(yǎng)的宮頸腺癌、鱗癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、粘附、侵襲能力的影響。初步探討CXCR4-CXCL12相互作用在宮頸癌轉(zhuǎn)移發(fā)生中的作用及CXCR4抑制劑抑制宮頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的可能性，為CXCR4抑制劑用于臨床提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

9、 方法：①細(xì)胞免疫化學(xué)法、Western blot法及流式細(xì)胞儀檢測(cè)CXCR4/CXCL12在宮頸癌細(xì)胞HeLa、SiHa細(xì)胞的表達(dá)情況。 ②侵襲性實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、粘附性實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)CXCR4/CXCL12相互作用對(duì)HeLa、SiHa細(xì)胞侵襲能力、運(yùn)動(dòng)能力、粘附能力的影響。 ③侵襲抑制性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CXCR4抑制劑對(duì)HeLa、SiHa侵襲能力的影響。 結(jié)果： ①HeLa，SiHa細(xì)胞均表達(dá)內(nèi)源性CXCR4、C

10、XCL12。但兩者在HeLa細(xì)胞的表達(dá)均強(qiáng)于SiHa細(xì)胞。 ② CXCL12呈劑量依賴(lài)性誘導(dǎo)HeLa、SiHa細(xì)胞穿過(guò)仿人基底膜。100ng/ml～200ng/ml濃度時(shí)誘導(dǎo)效果最佳。 ③在相同濃度CXCL12(200ng/ml)誘導(dǎo)下，HeLa、SiHa細(xì)胞經(jīng)CXCR4生物抑制劑MAB170(20ug/ml)處理后，與對(duì)照組(MAB170=0ul/ml)相比，穿透仿人基底膜細(xì)胞數(shù)明顯減少(p=0.000)。 ④

11、HeLa、SiHa細(xì)胞經(jīng)CXCL12(200ng/ml)處理后，HeLa細(xì)胞一周內(nèi)爬滿(mǎn)六孔板，SiHa細(xì)胞四天爬滿(mǎn)六孔板。對(duì)照組(0ng/ml)所用時(shí)間均長(zhǎng)于處理組。MAB170(20ug/ml)與CXCL12(200ng/ml)共同作用于細(xì)胞后，與前兩組相比，細(xì)胞爬行速度明顯減慢。 ⑤HeLa細(xì)胞無(wú)處理組與CXCL12(200ng/ml)處理組之間(p=0.038)；CXCL12(200ng/ml)處理組與CXCL12(200

12、ng/ml)與MAB170(20ug/ml)共同處理組之間(p=0.015)，HeLa細(xì)胞粘附能力差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但無(wú)處理組與CXCL12及MAB170共同處理組間HeLa細(xì)胞粘附能力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.144)。SiHa細(xì)胞株無(wú)處理組與CXCLl2(200ng/ml)處理組之間(p=0.007)，無(wú)處理組與CXCL12(200ng/ml)及MAB170(20ug/ml)共同處理組間(p=0.024)，SiHa細(xì)胞株粘附能力差

13、異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但CXCL12處理組與CXCL12與MAB170共同處理組之間(p=0.078)，SiHa細(xì)胞粘附能力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.宮頸腺癌、鱗癌細(xì)胞株均表達(dá)內(nèi)源性CXCR4及CXCL12。但兩者在HeLa細(xì)胞株的表達(dá)均強(qiáng)于SiHa細(xì)胞株。 2.CXCL12可增強(qiáng)HeLa、SiHa細(xì)胞移動(dòng)、侵襲、粘附能力。 3.CXCR4抑制劑可有效抑制CXCL12增強(qiáng)的HeLa、SiHa細(xì)胞移動(dòng)、侵襲