激發(fā)CD40信號對人肺癌細胞的生物學作用及其機制研究.pdf

1、目的:探討激發(fā)CD40信號對人肺癌細胞株的生物學作用及其相關(guān)機制.方法:以人肺癌細胞株H460、A549和SPC-A-1為研究對象,以可溶性CD40配體(sCD40L)及激發(fā)型CD40單克隆抗體(5C11)激發(fā)肺癌細胞中的CD40信號,采用四氮唑鹽(MTT)比色、<'3>H標記胸腺脫氧嘧啶核苷(<'3>H-TdR)摻入法檢測激發(fā)CD40信號對肺癌細胞增殖的影響,免疫熒光標記和流式細胞術(shù)測定細胞表型、細胞周期、細胞內(nèi)腫瘤壞死因子受體相關(guān)因

2、子(TRAFs)表達譜及細胞凋亡的改變,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)測定sCD40L對凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax表達的影響.在CD40激發(fā)前后加入化療藥物順鉑(DDP)或線裂霉素(MMC),MTT比色法測定CD40激發(fā)前后化療藥對細胞增殖的影響,流式細胞術(shù)測定CD40激發(fā)前后化療藥物對肺癌細胞的殺傷作用.結(jié)果:(1)激發(fā)CD40信號可抑制表達CD40細胞H460、A549的增殖.(2)激發(fā)CD40信號72h后,H460、A5

3、49細胞表面CD49e、CD54、TNFRⅠ及CD95L的表達明顯升高,而TNFRⅡ的表達下降(與對照組比較P<0.05).激發(fā)CD40信號可下調(diào)H460、A549細胞中TRAF2、3、5、6的表達(P<0.05).(3)激發(fā)CD40信號后,H460、A549細胞中G<,1>期細胞比例增加,S期細胞比例減少(P<0.05).(4)激發(fā)CD40信號短期(72h)內(nèi)并不引起H460、A549細胞明顯凋亡,但可上調(diào)Bax基因的表達.(5)激發(fā)

4、CD40信號可增強DDP及MMC對H460、A549細胞增殖的抑制并增強DDP及MMC對H460、A549的殺傷力(P<0.05).(6)CD40陰性的細胞株SPC-A-1經(jīng)sCD40L或5C11處理后無上述變化(P>0.05).結(jié)論:激發(fā)CD40信可引起表達CD40的肺癌細胞H460、A549生長抑制以及細胞周期、細胞表型和TRAF表達譜改變,并可引起凋亡相關(guān)基因Bax表達的改變.同時激發(fā)CD40信號可增強H460、A549細胞對化療