臨床基因擴增檢驗實驗室管理資料

1、及,河南省衛(wèi)生廳臨床檢驗中心蘇 天 水,,20世紀80年代以來,核酸分子序列分析和DNA合成自動化技術的發(fā)展.基因分析,基因重組,基因擴增技術廣泛應用于生命科學的各個領域. 80年代后期基因擴增技術逐漸應用到醫(yī)學生物學實驗中.并逐步應用到臨床.對疾病的診斷,治療.科研和預防起到積極的作用. 由于對基因擴增實驗了解不足,如實驗室環(huán)境,儀器設備,實驗試劑,人員素質(zhì),環(huán)境污染,質(zhì)量控制等條件考慮不周.出現(xiàn)了交叉污染,檢驗

2、結果不準確等問題.因此,衛(wèi)生部于1998年下發(fā)暫時停止基因擴增實驗的臨床應用.緊接著在衛(wèi)生部的指導下,組織專家多次研究論證,于2002年1月14日發(fā)布,,第一章 總 則一,目的 規(guī)范臨床基因擴增檢驗實驗室管理 保證臨床基因擴增檢驗實驗室質(zhì)量 保證臨床診斷,治療的科學性,合理性二.臨床基因擴增檢驗的種類 基本原理是擴增檢測DNA,RNA（cDNA）為方法的檢測技術 放大靶核酸

3、 聚合酶鏈反應(PCR) 連接酶鏈反應(LCR),,轉錄依賴的放大系統(tǒng)(TAS) 自主序列復制系統(tǒng)(3SR) 鏈替代擴增(SDA) 放大核酸雜交鏈 b-DNA 依賴雜交鏈信號 斑點雜交三. 適用實驗室 二級以上(含二級)醫(yī)院設立的臨床基因擴增檢驗實驗室,,核酸檢測技術分類1。靶基因擴增聚合酶鏈反應（polymerase Chain reactio

4、n)轉錄依賴的放大系統(tǒng)(Transcription-basedAmplification System TAS, or Transcription-Mediated Amplification TMA 自主序列復制系統(tǒng)（Self-Sustained Sequence Replication 3SR) 鏈替代擴增(Strand Displacement Amplif

5、ication SDA 核酸系列依賴性擴增（Nucleic Acid Sequence- Based Amplification NASBA) 2 。探針擴增。連接酶反應（LCR）。 3。分枝狀DNA探針測定(branched DNA, b-DNA),,四.

6、 臨床基因擴增檢驗實驗室的試劑要求 臨床基因擴增檢驗實驗室使用的試劑必須經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準的臨床檢驗試劑五.質(zhì)量監(jiān)督管理 部,省.自治區(qū).直轄市臨床檢驗中心負責對所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴增檢驗實驗室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作,,第二章 實驗室設置和驗收六. 設置標準和驗收程序 設置標準 (見附件),,實驗室區(qū)域設置原則 試劑貯存和準備區(qū) 標本制備區(qū)

7、 擴增反應混合物配制和擴增區(qū) 擴增產(chǎn)物分析區(qū)使用自動分析儀后兩區(qū)可合并各區(qū)物品固定物流,人流單向流動 各區(qū)設備按配置,,技術驗收申請申請材料準備（一）《醫(yī)療機構執(zhí)業(yè)許可證》復印件;（二）擬設置基因擴增檢驗實驗室醫(yī)院的醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、對臨床基因擴增檢驗的需求情況以及實驗室運行的預測分析；（三）擬設基因擴增檢驗實驗室的設置平面圖；,,（四）實驗室主要負責人簡歷表(見附表1);（五）實驗室工作

8、人員一覽表(見附表2);（六）主要儀器設備表(見附表3);（七）擬開展的臨床基因診斷項目(見附表4);（八）實驗室相關程序文件和標準操作程序（SOP）（見附表5）;（九）檢驗報告樣單 份;（十）其它有關質(zhì)量文件名稱或證明材料。,,七. 部中心和省,自治區(qū),直轄市中心共同組織專家組按照進行技術驗收.驗收后20天內(nèi)將驗收報告寄送至申請機構.八. 省級衛(wèi)生行政部門認可 驗收合格報告后,將驗收材料一套送至省級衛(wèi)生行

9、政部門備案.15天未收到省廳不同意的意見.方可開展驗收合格的臨床基因擴增檢驗項目.九. 未經(jīng)驗收合格并報省廳備案,醫(yī)療機構不得開展臨床基因擴增檢驗.,,第三章 實驗室監(jiān)督管理十.臨床基因擴增檢驗實驗室必須按照 開展工作十一. 實驗室技術人員要求 上崗培訓 考核合格 持證上崗 部中心備案 培訓機構 衛(wèi)生部

10、臨檢中心 省廳指定并經(jīng)部中心認定的機構 使用統(tǒng)一教材,,十二. 科研用基因擴增檢驗實驗室 不得向臨床出具檢驗報告 不得向病人收取任何費用十三. 質(zhì)量要求 臨床基因擴增檢驗實驗室必須做室 內(nèi)質(zhì)控 臨床基因擴增檢驗實驗室必須參加 部中心組織的室間質(zhì)評,,十四. 部中心按照和協(xié)

11、調(diào),組織省檢驗中心監(jiān)測臨床基因擴增檢驗實驗室的檢驗質(zhì)量.結果報省衛(wèi)生廳,并抄送被檢單位.十五. 部中心.省中心受上級衛(wèi)生行政部門委托可對臨床基因擴增檢驗實驗室進行檢查.被檢機構不得拒絕或隱瞞. 檢查結果報上級部門,中心不具有處罰權.,,十六. 質(zhì)量不合格的處理 警告 對初次不合格暫停不合格項目.限期整改 , 對兩次不合格的實驗室,停止開展該項目。 重新恢復該項目必須再次進行技術

12、驗收.并報衛(wèi)生廳核準,,十七. 未經(jīng)驗收擅自開展臨床基因擴增檢驗的醫(yī)療機構處理辦法 由縣級衛(wèi)生行政部門責令其限期改正.并可處以5000元以下罰款.情節(jié)嚴重的,吊銷其.并予以公告. 十八. 違反下列條款也要處理 超范圍開展項目 試劑不合格 無室內(nèi)質(zhì)控 無室間質(zhì)評 弄虛作假 科研項目收費 無證上崗

13、 儀器無校準,,第四章 附 則十九. 采供血機構參照本辦法執(zhí)行二十. 技術驗收經(jīng)費按國家有關規(guī)定執(zhí) 行二十一.本辦法由衛(wèi)生部負責解釋二十二,自發(fā)布之日起執(zhí)行,,湖北省衛(wèi)生廳文件摘錄1 三級醫(yī)院原則上可設置 各縣可選1-2所二級醫(yī)院設置 其他醫(yī)療機構不得設置 2 對已設置或擬開展的醫(yī)療機構要根據(jù)區(qū)域衛(wèi)生規(guī)劃設置,按規(guī)定程序申報3 申報單

14、位按行政管理程序報衛(wèi)生廳備案,經(jīng)省檢驗中心初審后上報部中心4 必須開展室內(nèi)質(zhì)控和參加湖北檢驗中心室間質(zhì)評,質(zhì)控物由省中心統(tǒng)一管理,,臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范一.臨床基因擴增檢驗實驗室的規(guī)范化設置及其管理 規(guī)范化設置 1.試劑貯存和準備區(qū) 2.標本制備區(qū) 3.擴增區(qū) 4.擴增產(chǎn)物分析區(qū),,1.試劑貯存和準備區(qū): 試劑制備.試劑分裝.主反應混合液制備

15、 2.標本制備區(qū): 臨床標本保存. 核酸提取.貯存. 加入擴增管試劑的過程 3.擴增區(qū): DNA或cDNA擴增 4.擴增產(chǎn)物分析區(qū): 擴增片段的測定,,人流物流方向 試劑貯存和準備區(qū) 標本制備區(qū) 擴增分

16、析區(qū),,,,,PCR實驗室布局原則1，三區(qū)必須相互獨立，使用中始終保持分隔狀態(tài)。2，各區(qū)可移動物品必須專用并有標識3，標本區(qū)，擴增區(qū)等可能出現(xiàn)污染物的區(qū)域必須安裝排風裝置。,,各工作區(qū)環(huán)境要求1 緩沖間; 更衣,換鞋,手套等2 通風, 空調(diào)3 傳遞通道(含消毒條件)4 消毒條件: 紫外燈,桌面消毒劑,5 安全措施 洗眼液等6 污物處理 次氯酸鈉先浸泡后處理,,樣品收集 分項登

17、記 要求唯一性編號 判斷是否合格 防止交叉污染樣品運輸樣品貯藏,,實驗中的質(zhì)量控制實驗報告檢驗結果解釋的有關問題 當面解釋 電話詢問 記錄,,污染及解決 試劑污染 用具污染 樣品污染 環(huán)境污染

18、 防止措施 保持環(huán)境衛(wèi)生 用品徹底消毒 切斷污染途徑,,PCR檢驗項目的申報和審定原則病原體無法培養(yǎng)，培養(yǎng)困難，培養(yǎng)時間太長。實驗室只能按審定的項目開展檢驗需要新增項

19、目必須申請增補,,PCR實驗室工作人員的資格和培訓單位的審定工作人員的資格1，衛(wèi)生技術人員資格證2，PCR實驗室技術人員培訓合格證PCR實驗室技術人員培訓單位資格1，省級衛(wèi)生行政部門委托書2，衛(wèi)生部檢驗中心認定書,,附件：PCR實驗室SOP文件提綱管理文件部分1 。 PCR實驗室設置及管理2 。 PCR實驗室人員配置及管理3 。實驗人員的培訓管理4 。儀器設備管理5 。實驗室內(nèi)務管理,,6 。檢驗報告單管理

20、7 。試劑準備區(qū)的配置、功能及管理8 。標本制備區(qū)的配置、功能及管理9 。擴增區(qū)的配置、功能及管理附： 臨床基因擴增實驗室規(guī)章制度 試劑準備區(qū)工作制度 標本制備區(qū)工作制度 擴增分析區(qū)工作制度,,標準操作程序文件部分10.定量PCR擴增儀使用、維護及校準程序11.離心機使用與維護標準操作程序12.超凈工作臺使用與維護標準操作程序13.生物安全柜使用與維護標準操作程序

21、14.漩渦振蕩器使用與維護標準操作程序15.加樣器使用與維護標準操作程序16.加樣器校準操作程序,,17.冰箱使用與維護標準操作程序18.紫外線消毒車使用與維護標準操作程序19.恒溫金屬浴使用與維護及校準程序20.傳遞窗使用與維護標準操作程序21.儀器故障時的標記放置標準操作程序22.臨床標本的采集標準操作程序23.標本驗收和保存的標準操作程序24.標本編號的標準操作程序25.實驗臺放置規(guī)范程序,,26.核酸擴增的

22、標準操作程序27.HBV核酸擴增標準操作程序28.HCV核酸擴增標準操作程序29.檢測結果報告程序30.實驗結果有效性判斷程序31.實驗結果保存程序32.室內(nèi)質(zhì)控操作程序33.室間質(zhì)評操作程序34.實驗室生物安全防護程序,,35.實驗室廢棄物標準處理程序36.實驗室清潔標準程序37.試劑質(zhì)量檢測標準操作程序38.實驗耗材質(zhì)量檢測標準操作程序39.實驗耗材購買、驗收及貯存程序40.實驗室化學試劑貯存程序41.實

23、驗室常用液體試劑配制操作程序42.抱怨處理程序43.應急處理程序44實驗室污染緊急防范程序,,附表及附圖實驗室平面圖結果報告單模式實驗室主要負責人簡歷表實驗室工作人員一覽表主要儀器設備一覽表擬開展臨床擴增項目表冰箱溫度記錄表,,工作區(qū)溫度、濕度記錄表試劑清點及配置登記表標本貯存溫度記錄表擴增儀器運行狀況記錄表離心機運行狀況記錄表工作人員體檢表,,PCR實驗室復檢重點項目 1.人員管理

24、 2.標本管理· 3.設備管理 4.質(zhì)控管理 5.檢測方法,,6.檢驗報告質(zhì)量 7.生物安全執(zhí)行及記錄 8.各項記錄規(guī)范要求