萊茵衣藻纖毛內(nèi)蛋白IFT139的原核表達、純化及多克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、IFT139是萊茵衣藻纖毛內(nèi)運輸?shù)鞍譏FT復合物A中的一個重要組份。ift139在大腸桿菌中的表達、蛋白純化及多克隆抗體的制備，對于今后研究IFT139在纖毛中的特殊作用及IFT139與其他運動相關(guān)蛋白的相互作用奠定了重要基礎(chǔ)，也對于纖毛病進一步的研究進展提供了有利的依據(jù)。
　　本實驗(1)以pBlu-ift139質(zhì)粒為模板，通過PCR方法獲得兩端帶有相應酶切位點的ifi139目的片段，并成功構(gòu)建pGEX-2T-ifi139、pM

2、AL-c2-ift139與pET-28a(+)-ift139三個重組質(zhì)粒。(2)將三種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)移到BL21，進行IPTG（濃度為0.2 mmol/L）的誘導表達，GST-139、MBP-139及HIS-139三種融合蛋白在誘導后均有所表達，帶有MBP標簽的蛋白表達大部分分布于上清，GST標簽的融合蛋白在上清和沉淀中均有分布，但表達量較低，HIS標簽的融合蛋白均以沉淀的形式存在，最后選擇經(jīng)過親和層析純化后的MBP-IFT139融合蛋白作

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