內皮素-1通路對小鼠糖尿病心臟、血管并發(fā)癥的影響及分子機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 內皮素-1通路對小鼠糖尿病眼動脈病變的影響及分子機制
　　目的：探討內皮素-1通路對小鼠糖尿病眼動脈病變的影響及內皮素受體拮抗劑對糖尿病眼動脈病變的潛在保護作用。
　　方法：將60只6周齡雄性C57BL/6小鼠隨機分為正常對照組(Control)、糖尿病對照組(DM)、糖尿病藥物干預組(DM-B)，每組20只。鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射，連續(xù)5天以50mg/kg劑量建立

2、糖尿病模型。對DM-B組小鼠給予內皮素受體拮抗劑波生坦(100mg/kg)灌胃，Control組、DM組給予同等劑量生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)24周。24周后取眼動脈標本，進行HE染色，TUNEL染色，實時定量PCR檢測眼動脈ET-1、VEGF、TNF-α、NF-kB、MMP-2、MMP-9的mRNA表達水平，Western Blot檢測VEGF、NF-kB、MMP-2、MMP-9蛋白的表達水平。
　　結果：與Control組相

3、比，DM組及DM-B組空腹血糖升高(P＜0.05)，DM組與DM-B組相比，空腹血糖水平接近(P＞0.05)。眼動脈HE染色，眼動脈總厚度、各層厚度，DM組均低于DM-B組(P＜0.05)。TUNEL染色，Control組未見明顯細胞凋亡，細胞排列規(guī)則;DM組可見明顯的細胞凋亡，有核碎片出現(xiàn);DM-B組可見細胞凋亡，凋亡細胞數(shù)量較糖尿病組減少。實時定量PCR相對定量結果，Control組相比,DM組眼動脈中ET-1、VEGF、TNF-α

4、、NF-kB、MMP-2、MMP-9mRNA的表達增加(P＜0.05);DM-B組與DM組相比，DM-B組ET-1、VEGF、TNF-α、NF-kB、MMP-2、MMP-9mRNA表達均降低(P＜0.05)。Western Blot檢測結果，DM組中VEGF、NF-kB、MMP-2、MMP-9mRNA蛋白的表達較Control組增加(P＜0.05);DM-B組VEGF、NF-kB、MMP-2、MMP-9mRNA表達均較DM組降低(P＜0

5、.05)。
　　小結：內皮素受體拮抗劑波生坦阻斷ET-1通路，抑制ET-1過表達，減輕糖尿病小鼠眼動脈病變。
　　第二部分 內皮素-1通路對小鼠糖尿病主動脈病變的影響及分子機制
　　目的：探討內皮素-1通路對小鼠糖尿病主動脈病變的影響及內皮素受體拮抗劑對糖尿病主動脈病變的潛在保護作用。
　　方法：將60只6周齡雄性C57BL/6小鼠隨機分為正常對照組(Control)、糖尿病對照組(DM）、糖尿病藥物干預組(DM

6、-B)，每組20只。鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射，連續(xù)5天以50mg/kg劑量建立糖尿病模型。對DM-B組小鼠給予內皮素受體拮抗劑波生坦(100mg/kg)灌胃，Control組、DM組給予同等劑量生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)24周。24周后取主動脈標本，進行油紅O染色，HE染色，實時定量PCR檢測VEGF、ET-1、TNF-α、MMP-2、MMP-9的mRNA表達水平。
　　結果：與Control組相比，DM組及DM-B組空腹血

7、糖升高(P＜0.05)，DM組與DM-B組相比，空腹血糖水平接近(P＞0.05)。主動脈油紅O染色，Control組主動脈較光滑，輕微動脈粥樣硬化斑塊;DM組整個主動脈粥樣硬化嚴重，斑塊明顯增加;DM-B組主動脈粥樣硬化斑塊較DM組明顯減少。主動脈HE染色，Control組小鼠主動脈內膜光滑，無明顯斑塊形成，血管內皮細胞及細胞核形態(tài)正常，排列規(guī)則，間質未見炎性細胞浸潤;DM組主動脈內膜欠光滑，脂質沉著、斑塊形成明顯，平滑肌纖維排列紊亂，

8、血管內皮明顯增生，血管內皮細胞及細胞核形態(tài)異常，間質大量炎性細胞浸潤;DM-B組斑塊負荷明顯減輕，血管內皮增生減輕，炎性細胞浸潤減少。實時定量PCR檢測，DM組與DM-B組VEGF mRNA表達低于Control組(P＜0.05)，而ET-1、TNF-α、MMP-2、MMP-9mRNA表達高于Control組(P＜0.05)。DM-B組VEGF mRNA表達較DM組升高(P＜0.05)，ET-1、TNF-α、MMP-2、MMP-9mRN

9、A表達較DM組降低(P＜0.05)。
　　小結：內皮素受體拮抗劑波生坦阻斷ET-1通路，抑制ET-1過表達，減輕糖尿病小鼠主動脈病變。
　　第三部分 內皮素-1通路對小鼠糖尿病心臟病變的影響及分子機制
　　目的：探討內皮素-1通路對小鼠糖尿病心臟病變的影響及內皮素受體拮抗劑對糖尿病心臟病變的潛在保護作用。
　　方法：將30只6周齡雄性C57BL/6小鼠隨機分為正常對照組(Control)、糖尿病對照組(DM)、糖

10、尿病藥物干預組(DM-B)，每組10只。鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射，連續(xù)5天以50mg/kg劑量建立糖尿病模型。對DM-B組小鼠給予內皮素受體拮抗劑波生坦(100mg/kg)灌胃，Control組、DM組給予同等劑量生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)24周。24周后進行超聲心動圖檢查，取心臟標本，進行心肌組織MASSON染色，ELISA法檢測小鼠心肌組織中VEGF、ET-1、TGF-β、MMP-2、MMP-9含量。
　　結果：與Con

11、trol組相比，DM組及DM-B組空腹血糖升高(P＜0.05)，DM組與DM-B組相比，空腹血糖水平接近(P＞0.05)。與Control組相比，DM組及DM-B組E/A比值升高(P＜0.05)。DM-B組的E/A比值較DM組減少(P＜0.05)。MASSON染色，Control組心肌組織禾見明顯的纖維化，DM組心肌組織可見大片纖維化改變，DM-B組較DM組纖維化程度明顯改善。ELISA測定心肌組織中ET-1、TGF-β、NF-kB、M

12、MP-2、MMP-9含量，與Control組相比，ET-1、TGF-β、NF-kB、MMP-2、MMP-9在DM組含量增加(P＜0.05)，DM-B組中ET-1、TGF-β、NF-kB、MMP-2、MMP-9含量較DM組降低(P＜0.05)。
　　小結：內皮素受體拮抗劑波生坦阻斷ET-1通路，抑制ET-1過表達，減輕糖尿病小鼠心臟病變。
　　結論：糖尿病狀態(tài)下會導致ET-1過表達，從而進一步導致VEGF、TNF-α、NF-k