芝麻素對兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞JAK1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本文通過研究及比較芝麻素與AG490在動脈粥樣硬化形成過程中對兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞JAK1表達(dá)的影響，探討芝麻素在抗動脈粥樣硬化機(jī)制中的作用。
　　方法:(1)兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及傳代。用傳代成功后的對數(shù)生長期的主動脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行實驗。(2)細(xì)胞分組及處理:①正常對照組:在無菌條件下，將實驗細(xì)胞于無血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24-48小時;②ox-LDL組:將實驗細(xì)胞在100mg/L濃度的ox-LDL培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小

2、時，然后在無血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時;③AG490（JAK1抑制劑）組:將實驗細(xì)胞培養(yǎng)于50μ mol/L的AG490培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時，然后在ox-LDL培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時，最后在無血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時;④芝麻素組:將實驗細(xì)胞在芝麻素培養(yǎng)基(60μ mol/L)中培養(yǎng)24小時，然后在100mg/L的ox-LDL培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時，最后在無血清的DEME培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時。(3)采用Real-timePC

3、R方法檢測兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖過程中芝麻素、AG490對JAK1表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:正常對照組:兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞為梭形或多角形，胞漿豐富，邊界清楚，可見典型的呈“鋪路石狀”鑲嵌排列的細(xì)胞，單層分布。ox-LDL組:兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞圓形細(xì)胞明顯增多，邊界不清，數(shù)目明顯減少，凋亡小體出現(xiàn)，細(xì)胞碎片增多，細(xì)胞間隙變寬，偶有脫落。芝麻素組:兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞呈多角形或梭形，邊界清楚，排列接近正常對照組，但細(xì)胞數(shù)少于正常對照組細(xì)胞且多于o

4、x-LDL組。PCR產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳分析，在250bp處出現(xiàn)一條特異性條帶。成功擴(kuò)增出兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞JAK1基因。以稀釋的重組質(zhì)粒作為PCR反應(yīng)的模板，分別以各參數(shù)的上、下游引物為引物，經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳分析表明，在2945bp處出現(xiàn)一條特異性條帶。成功的擴(kuò)增出兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞JAK1基因的克隆質(zhì)粒。ox-LDL組，芝麻素組，AG490組JAK1-mRNA表達(dá)明顯高于正常對照組，有顯著性差異P＜0.05;芝麻素組與AG490