兩種木賊提取物對動脈粥樣硬化早期大鼠主動脈內(nèi)皮細胞的影響.pdf

1、目的：前期實驗表明木賊水煎劑可以調(diào)節(jié)脂代謝、抑制內(nèi)皮細胞(endothelial cell，EC)凋亡，抗動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)早期事件的發(fā)生。本實驗對木賊進行初步提取分離，對比觀察提取物對大鼠主動脈EC凋亡的影響及其形態(tài)學變化，探討木賊保護血管內(nèi)皮的有效部位及其可能機制。 方法： 1 木賊有效部位的提取、分離木賊水煎劑經(jīng)正丁醇萃取、分離為兩部分，其中正丁醇萃取液回收至干，蒸餾水定容至1.

2、25g(生藥)/ml；剩余液亦濃縮至相同濃度，均冰箱保存?zhèn)溆谩?2 兩種木賊提取物的藥效動物實驗健康雄性SD大鼠50只，隨機分為五組：正常組、模型組、吉非羅齊組、木賊正丁醇提取物組、正丁醇提取剩余物組，每組10只。給藥組每天飼喂高脂飼料且按10ml/kg標準灌胃給藥，分別合吉非羅齊0.16g/kg·d)，生藥木賊12.5g/kg·d)，正常組和模型組每天灌等量生理鹽水，并隨動物體重增加及時調(diào)整藥量。 3 指標檢測

3、 九周末眶后取血，酶法檢測：膽固醇(total ch01esterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白(high densitylipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、極低密度脂蛋白(very low density 1ipoprotein，VLDL)；流式細胞術檢測EC周期、凋亡率及相關基因caspase-3、突變型p53、bcl

4、-2蛋白表達，計算細胞增殖指數(shù)(proliferativeindex，PI)；分別以肉眼、光鏡及電鏡觀察主動脈內(nèi)膜形態(tài)變化。 結果： 1 實驗大鼠一般狀況正常組大鼠飲食正常，活動自如。模型組體重增長較快；但隨實驗進程，進食減少、精神較差。吉非羅齊組、兩木賊給藥組大鼠飲食、活動、精神狀態(tài)均明顯好于模型組。 2 兩種木賊提取物對血脂的影響模型組TC、LDL較正常對照組明顯升高(P<0.01)；吉非羅齊組TG、LD

5、L、VLDL較模型組顯著降低(P<0.01)，HDL明顯升高(P<0.01)；兩木賊給藥組降低TG、VU)L作用與吉非羅齊相似(P<0.05)，提取剩余物組HDL升高顯著(P<0.01、)，與正丁醇提取物組相比具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 3 兩種木賊提取物對主動脈EC凋亡相關基因caspase-3、突變型p53、bcl-2蛋白表達的影響EC凋亡率及突變型p53、caspase-3表達模型組較正常對照組明顯升高(P<0.0

6、5)，吉非羅齊組較模型組顯著降低(P<0.05)；正丁醇提取物下調(diào)caspase-3表達作用明顯(P<0.05)。Bcl-2蛋白表達在各組中均未見明顯變化(P>0.05)。 4 兩種木賊提取物對主動脈EC周期與凋亡的影響模型組停留在GM<,0>/G<,1>期的EC較正常對照組明顯升高(P<0.01)，S和G<,2>/M期細胞百分比顯著減少(P<0.01)，PI降低顯著(P<0.01)，凋亡率顯著升高(P<0.01)；兩種木賊提

7、取物對細胞周期的影響與吉非羅齊相似，較模型組停留在G<,0>／G<1,>期細胞百分比顯著降低(P<0.01)，S和G<,2>/M期細胞明顯增多(P<0.05)，PI顯著升高(P<0.01)，細胞凋亡率顯著減少(P<0.01)。 5 主動脈形態(tài)學改變 5．1肉眼觀察正常組血管彈性好，內(nèi)膜平滑，富有光澤；模型組動脈彈性減低，管壁稍增厚，光澤度稍差；吉非羅齊組、兩木賊給藥組與正常組相比變化不明顯。 5．2光鏡觀察

8、正常組動脈EC連續(xù)、形態(tài)規(guī)則，表面未見細胞粘附，內(nèi)皮下間隙較小。模型組血管壁增厚，內(nèi)皮呈不連續(xù)性缺失，底層膠原纖維暴露，內(nèi)皮下間隙明顯增寬。吉非羅齊組內(nèi)皮較連續(xù)，形態(tài)規(guī)則，明顯好于模型組。正丁醇提取物組內(nèi)膜連續(xù)、光滑，EC排列整齊，明顯好于模型組。提取剩余物組內(nèi)膜較光滑，部分EC缺失、單核細胞粘附，但好于模型組。兩木賊給藥組之間未見明顯差別。 5．3掃描電鏡觀察正常對照組大鼠主動脈EC長梭形，核區(qū)飽滿，連接緊密，可見長短不等的典

9、型微絨毛。模型組EC排列紊亂，表面微絨毛減少甚至消失，呈大小不等的蟲蝕狀、火山口狀缺損，可見細胞碎片、纖維素等附著。吉非羅齊組EC形態(tài)完整，輪廓清晰，偶見小洞狀破損。木賊正丁醇提取物組EC呈帶狀排列，核區(qū)飽滿，可見典型微絨毛，散在的脂肪小顆粒黏附。正丁醇提取剩余物組EC連接較緊密，局部壞死、脫落，可見較大脂肪顆粒黏附。 5．4透射電鏡觀察正常對照組大鼠EC胞漿內(nèi)吞飲小泡豐富，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)正常。模型組EC壞死、脫落嚴重，殘

10、存細胞內(nèi)吞飲小泡、脂質(zhì)空泡數(shù)量明顯增多，線粒體腫脹、融合，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、脫顆粒。吉非羅齊組EC吞飲小泡、脂質(zhì)空泡數(shù)量減少，部分線粒體腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張。木賊正丁醇提取物組EC吞飲小泡、脂質(zhì)空泡明顯減少，部分線粒體輕度腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張減輕、脫顆粒。正丁醇提取剩余物組EC吞飲小泡和脂質(zhì)空泡較多，線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，游離核糖體散在于細胞質(zhì)中。 結論：兩種木賊提取物對AS早期大鼠降脂和保護內(nèi)皮的效果與前期水煎劑實驗結果