天然產物與OATP1B1相互作用的研究和OATP2B1N-糖基化對功能和表達的影響.pdf

1、有機陰離子轉運多肽（OATP）1B1是重要的肝攝取轉運蛋白，介導很多內源性物質和外源性藥物轉運到肝細胞。為了鑒別和研究天然產物中潛在的OATP1B1的調節(jié)劑，本實驗采用穩(wěn)定表達OATP1B1的中國倉鼠卵巢細胞（CHO），在96孔板中測定了21種常見天然化合物和提取物對OATP1B1介導熒光素甲氨蝶呤轉運的影響。該方法可進一步應用于高通量篩選大化合物庫。
　　結果表明：若干黃酮類化合物（如槲皮素、槲皮苷、蘆丁、菊花梗葉總黃酮和桑皮黃

2、素等）和三萜類化合物（如甘草次酸和甘草酸等）在體外實驗中顯著抑制了OATP1B1的轉運功能，其IC50值均小于16μM；黃酮類化合物比其對應的糖苷類化合物的抑制作用更強，而且糖的類型和糖鏈長度對其抑制作用均有影響。為了考察這些化合物對OATP1B1介導其他底物攝取的影響，我們建立了檢測OATP1B1藥物底物氟伐他汀和羅伐他汀的LC-MS/MS方法。研究結果表明，天然產物對OATP1B1轉運功能的影響具有底物依賴性。本論文的研究結果將有助

3、于預測和避免潛在的OATP1B1介導的不良藥物-藥物和藥物-食物相互作用，為臨床合理用藥提供實驗依據(jù)和指導。
　　有機陰離子轉運多肽2B1（OATP2B1）表達在胎盤、肝臟、乳腺、腦和腸等組織中，介導四溴酚酞磺酸鈉、3-硫酸雌酮和3-硫酸脫氫表雄酮等的轉運。糖基化是一種重要的蛋白翻譯后修飾，OATPs的共有結構特征—潛在的N-糖基化位點位于胞外環(huán)2和5上。為探究OATP2B1上N-糖基化對其表達及功能的影響，我們首先使用生物信息學

4、軟件預測4個潛在N-糖基化位點，并該對應位點處的將天冬酰胺突變成谷氨酰胺，得到四個單突變（N146Q、N176Q、N350Q和N538Q）和一個雙突變（N176/538Q）。然后對于這些OATP2B1突變體的功能和表達的評估實驗在HEK293細胞中進行。
　　結果表明：OATP2B1上的天冬酰胺176和538是糖基化位點。當這兩個位點被分別突變時，均使得蛋白水平降低以及轉運活性顯著降低；當兩個位點被同時突變時，蛋白水平顯著下調，同