苦參素影響ARID1A在肝癌細胞株MHCC97L和MHCC97H中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:檢測ARID1A基因與蛋白在人肝癌細胞株MHCC97L、MHCC97H和人正常肝細胞株L02中表達的變化,并觀察苦參素(OM)對不同轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞株MHCC97L和MHCC97H的抑制作用及其對ARID1A表達的影響,探討苦參素抑制肝癌的可能作用機制。
  方法:以人肝癌細胞株MHCC97L、MHCC97H和人正常肝細胞株L02細胞為研究對象。(1)利用細胞免疫熒光技術(shù)檢測ARID1A在3種細胞中的表達與定位;(2)用實

2、時熒光定量PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)分別檢測ARID1AmRNA和BAF250a蛋白在3種細胞株中的表達;(3) MTT法檢測OM對MHCC97L和MHCC97H細胞增殖的影響;(4)用qRT-PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)分別檢測OM干預(yù)后ARID1AmRNA和BAF250a蛋白在2株肝癌細胞中的表達。
  結(jié)果:
  (1)細胞免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)ARID1A在MHCC97L、MHCC97H和L02細

3、胞有不同表達,且均定位于細胞核中;
  (2) qRT-PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),ARID1AmRNA在MHCC97L和MHCC97H細胞中的表達均低于L02細胞,但在MHCC97L和MHCC97H之間的相對表達量比較無差異;
  (3) Western blot檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)在MHCC97L和MHCC97H細胞中BAF250a蛋白的表達均低于L02細胞,但在MHCC97L和MHCC97H之間的表達比較無差異。
  (4) M

4、TT法觀察發(fā)現(xiàn)不同濃度和時間OM干預(yù)MHCC97L和MHCC97H細胞后,OM濃度越高,細胞生長抑制率越高,呈劑量依賴性,隨著OM干預(yù)時間延長無明顯時間依賴性。
  (5) qRT-PCR檢測OM干預(yù)MHCC97L和MHCC97H細胞后發(fā)現(xiàn):與陰性對照組0mg/ml組比較,在濃度為0.5mg/ml-2.0mg/ml范圍時,ARID1A mRNA在MHCC97L和MHCC97H細胞中相對低表達,但在濃度為1.0mg/ml-4.0mg

5、/ml范圍時其相對表達量顯示出上升趨勢。同一濃度下ARID1AmRNA在MHCC97L和MHCC97H細胞中的表達無明顯差異。
  (6) Western blot檢測OM干預(yù)MHCC97L和MHCC97H后與對照組0mg/ml組比較,MHCC97L和MHCC97H細胞中BAF250a蛋白在OM濃度為0.5-4.0mg/ml范圍時表達量增多。在0.5mg/ml和1.0mg/ml濃度下,MHCC97L細胞中BAF250a蛋白的表達高

6、于MHCC97H細胞。
  結(jié)論:
  (1)ARID1A在肝癌細胞系和L02中存在不同的表達,MHCC97L和MHCC97H細胞中ARID1A的表達低于人正常肝細胞株L02。
  (2)苦參素對MHCC97L和MHCC97H人肝癌細胞株有抑制作用,苦參素能促進MHCC97L和MHCC97H肝癌細胞系中ARID1A編碼的蛋白的表達,對惡性程度較低的MHCC97L細胞作用較明顯;上調(diào)ARID1A蛋白的表達可能是苦參素抑制

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