原發(fā)性輕鏈型淀粉樣變的基因譜及其與臨床相關性的研究.pdf

1、目的：
　　原發(fā)性輕鏈型淀粉樣變(pAL)是一種免疫球蛋白輕鏈沉積在各個組織器官內造成多器官損害的單克隆漿細胞病。臨床表現(xiàn)取決于受累器官，可包括限制性心肌病、腎病綜合征、肝功能衰竭和自主神經病變等。目前已知pAL主要是亞單位蛋白質發(fā)生了構象改變所致，但發(fā)生構象改變的機制依舊不明。二代測序技術(Next generation sequencing)以其高通量、高時效和低成本三大特點，開始越來越多地應用于臨床研究。對于血液系統(tǒng)腫瘤，尤

2、其是罕見病種，尋找其腫瘤細胞特異性的基因突變，進而進行診斷及治療研究，已經成為該領域的重要研究手段。但是，目前pAL的基因譜及相應基因突變與臨床相關性方面都還缺乏系統(tǒng)的研究。
　　方法：
　　收集2015年12月至2017年5月在北京協(xié)和醫(yī)院確診為pAL的初治患者48例，收集患者骨髓標本和外周血標本，并隨訪收集患者的臨床資料。采用CD138免疫磁珠分選得到純化的骨髓漿細胞，再使用DNA Kit提取骨髓漿細胞和外周血單個核細胞

3、DNA，以自身外周血作為正常對照，對10例pAL患者進行全外顯子組測序。篩選出高頻突變基因和已知驅動基因，同時結合文獻報告過的pAL相關突變基因建立靶向基因譜。之后，擴大樣本量對48例pAL患者的骨髓漿細胞進行靶向基因測序。通過比較基因突變數(shù)量和不同基因的突變情況來探索pAL基因譜與臨床特征的相關性。采用SPSS22.0軟件進行統(tǒng)計分析，當p＜0.05時認為存在統(tǒng)計學差異。
　　結果：
　　本研究對10例患者進行全外顯子組測

4、序，共檢測到3307個SNVs，外顯子編碼區(qū)占14.3％，其中非同義突變占69.5％(錯義突變63.6％，stopgain5.5％，stoploss0.4％)。這10例患者骨髓漿細胞樣本的平均每Mbp堿基發(fā)生非同義突變數(shù)為:1.22(0.15-3.08)Mutations/Mb。當FDR值＜0.2，共得到12個高頻突變基因，其中有4個影響NF-κB信號通路，包括DUSP2，NFKBIA，KRAS,BIRC3，證明NF-κB信號通路可能在

5、pAL發(fā)病機制中具有重要作用。綜合全外顯子組測序的結果，篩選FDR值＜1，我們得到出52個高頻突變基因和17個已知驅動基因，并通過查閱文獻篩選出29個已在pAL中報道過的突變基因，建立了共含98個基因的靶向基因譜。
　　進一步對48例患者進行了上述98個基因的靶向測序，得到133個單核苷酸變異(SNVs)和20個插入/缺失突變(InDel)。48例患者中有41例患者(85％)存在至少一個SNVs或者InDel。總體突變頻率較低，平

6、均每個患者的突變個數(shù)為3（0-13）個。共檢測出70個突變基因。IGLL5是最常見的突變基因(17％)，其次是ASCC3(15％)，還有14例患者(29.2％)存在NF-κB信號通路相關基因的突變。高危組（Mayo2012分期3期和4期）患者的平均基因突變個數(shù)明顯高于低危組（Mayo2012分期1期和2期）患者（3.8±0.5vs2.1±0.5個，p=0.021）?？偵嫫?OS)與基因突變的數(shù)量呈負相關，存在4個或以上突變的患者的預計

7、1年存活率為52.1％，而不足4個突變的患者的預計1年生存率為90.4％(p=0.005)。當與Mayo2012分期（曲線下面積AUC=0.870）相比時，綜合測序結果的預后模型增加了預測潛力(AUC=0.915)。研究還發(fā)現(xiàn)pAL中存在4個重復突變:ASB15(c.844C＞T)、ASCC3(c.1595A＞G)、HIST1H1E(c.311C＞T)、和KRAS(c.35G＞A)。預后分析表明存在ASB15或HIST1H1E突變患者的

8、預后不良(p＜0.05)。
　　結論：
　　pAL骨髓漿細胞的總體突變頻率較低?；蛲蛔償?shù)量與患者的預后呈負相關，當基因突變個數(shù)≥4個時，其預后明顯更差。綜合基因突變數(shù)量與Mayo2012分期的預后模型具有更高的預測價值。高頻突變基因中存在4個與NF-κB信號通路相關基因(DUSP2、NFKBIA、KRAS、和BIRC3)，提示NF-κB信號通路的激活可能與pAL的發(fā)病機制相關。研究還發(fā)現(xiàn)了4個重復突變基因:ASB15、AS