肝臟脂蛋白酯酶LPL在糖脂代謝中的作用研究.pdf

1、隨著社會的發(fā)展，肥胖、糖尿病、心血管等代謝相關疾病的發(fā)病率逐年提升。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)代謝性疾病有一種共同的表現(xiàn)即血脂代謝紊亂。而引起血脂代謝紊亂的主要原因是血漿中運輸脂類的脂蛋白代謝異常。脂蛋白酯酶（ L ipo prote in lipa se，LP L）是一種限速酶，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用。LP L的主要生理功能是催化富含甘油三酯（ tr iglycer id e， T G)的脂蛋白——乳糜微粒（chylomicron,CM）和極低密度

2、脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDL)分解為脂肪酸和單酸甘油酯，為組織的氧化反應供能和貯存。由于生理狀態(tài)下，LP L主要在心肌、骨骼肌、脂肪組織等肝外組織中表達，在肝臟中的表達量極低，過去針對肝外組織LP L的研究居多，目前為止，對于肝臟LP L的功能了解很少。
　　本課題組根據(jù)Cre/LoxP技術的原理將LPL LoxP小鼠與受Alb啟動子介導、肝臟特異表達的Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠交配繁殖（

3、 Alb-cre）成功構建了LP L肝臟特異性敲除小鼠模型，并對小鼠模型進行相關脂代謝數(shù)據(jù)變化分析，最終得出結(jié)論，肝臟LP L對成年小鼠血漿脂質(zhì)代謝的調(diào)控具有重要的意義。
　　第一部分生理狀態(tài)下LPL在肝臟中的表達情況分析
　　目的：研究正常小鼠肝臟中LP L的表達情況。
　　方法：選取出生不同時期的C57BL/6小鼠，提取其肝臟及心肌、骨骼肌、肺、胃、腎臟、小腸、腦組織等肝外組織 RN A，并反轉(zhuǎn)錄成 cDN A，最

4、終通過Quantitative RT-PCR分析其LPL的mRNA表達水平。
　　結(jié)果：肝臟 LP L的表達在小鼠出生后的前三周呈上升趨勢，第三周時處于最高水平；三周后表達量迅速下降，六個月以后維持在較穩(wěn)定的低表達狀態(tài)。成年小鼠LP L主要在心肌、骨骼肌、腦組織等肝外組織中表達。
　　討論：成年小鼠肝臟中LP L的表達量很低。
　　第二部分 LPL基因肝臟特異性敲除小鼠模型的構建與鑒定
　　目的：構建LP L肝臟

5、特異性敲除小鼠模型，為研究肝臟LP L的功能提供實驗工具。
　　方法：將LPL LoxP工具鼠與受Alb啟動子介導、肝臟特異表達的Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠交配繁殖（ Alb-C re），提取后代小鼠鼠尾基因組DN A后，用P CR的方法對其基因型進行鑒定，基因型為 F/F/Cre的為所需小鼠模型。并用Quantitative RT-PCR鑒定模型是否構建成功。
　　結(jié)果：本課題組成功構建了敲除率達90％的LP L肝細胞特異性敲

6、除小鼠模型。
　　討論：小鼠模型的成功為接下去的實驗研究提供了理想的實驗工具。
　　第三部分肝臟LPL缺失，小鼠糖脂代謝指標的變化及其意義
　　目的：通過對LP L肝臟特異性敲除小鼠模型進行糖脂代謝有關實驗，分析肝臟LP L在糖脂代謝中的作用。
　　方法：肝臟LP L對脂代謝影響的研究中，對肝臟LP L基因敲除小鼠及高脂喂養(yǎng)小鼠血漿 LPL蛋白的表達及其活性進行測定，測定兩者血清中 TG、TC、FFA含量、餐后

7、T G清除能力、P407脂質(zhì)分泌實驗。糖代謝研究中，測定肝臟LP L敲除小鼠的空腹及隨機血糖、胰島素、葡萄糖耐量實驗、胰島素耐量實驗。
　　結(jié)果：肝臟LP L的缺失會引起血漿LP L含量及活性的明顯降低。餐后T G清除能力下降，血中T G、T C的含量升高，F(xiàn)FA含量下降。肝臟T G、T C水平不受影響。對腺病毒誘導的成年 LP L肝臟中敲除小鼠進行研究。實驗結(jié)果與Cre-Lo xp構建的小鼠模型一致。高脂飲食誘導的肥胖LP L肝