基于糖肽類抗生素親和作用的化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)革蘭氏陽(yáng)性菌.pdf

1、革蘭氏陽(yáng)性菌是一類威脅人類和動(dòng)物健康最主要的致病菌。其中金黃色葡萄球菌可以造成食物中毒，敗血癥，膿毒癥等嚴(yán)重危害；蠟樣芽孢桿菌和藤黃微球菌同樣也可以引起食物中毒和嚴(yán)重感染；變異鏈球菌是人類齲病的主要致病微生物，常見(jiàn)于牙菌斑中。鑒于革蘭氏陽(yáng)性菌對(duì)人類，動(dòng)物的危害，發(fā)展靈敏，簡(jiǎn)單，即時(shí)的革蘭氏陽(yáng)性致病菌的檢測(cè)新方法對(duì)臨床診斷具有重要意義?；瘜W(xué)發(fā)光分析法是一種依據(jù)于體系中待測(cè)物濃度與體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度在一定條件下呈線性定量關(guān)系的原理，利用儀器

2、對(duì)體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的檢測(cè)，進(jìn)而確定待測(cè)物含量的一種痕量分析方法。而生物發(fā)光是一種生物體系中發(fā)生的化學(xué)發(fā)光，它在化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生可見(jiàn)光。ATP發(fā)光是一種最常見(jiàn)的生物發(fā)光，它的反應(yīng)機(jī)理是熒光素酶在熒光素和氧氣的存在下，催化消耗ATP而產(chǎn)生較強(qiáng)的光輻射信號(hào)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴基于萬(wàn)古霉素的親和作用建立了一種利用生物發(fā)光法檢測(cè)革蘭氏陽(yáng)性菌活菌總量的新型分析策略。本項(xiàng)工作中，萬(wàn)古霉素作為一種新型分子識(shí)別試劑，修飾在羧基化的磁性

3、顆粒上用于從樣品基質(zhì)中快速分離和富集革蘭氏陽(yáng)性菌。隨后裂解捕獲的細(xì)菌，使三磷酸腺苷從細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)釋放，進(jìn)而通過(guò)采集生物發(fā)光反應(yīng)產(chǎn)生的發(fā)光信號(hào)來(lái)定量檢測(cè)革蘭氏陽(yáng)性菌的活菌總量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，四種革蘭氏陽(yáng)性菌，包括金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、蠟樣芽孢桿菌、變異鏈球菌在1×102-1×107 CFU ml-1范圍內(nèi)均與生物發(fā)光強(qiáng)度呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，其檢測(cè)限均為33 CFU mL-1(信噪比=3)。由于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌死菌對(duì)該方法的

4、檢測(cè)幾乎沒(méi)有干擾，該策略用于檢測(cè)活的革蘭氏陽(yáng)性菌表現(xiàn)出良好的特異性。同時(shí)該策略可成功地應(yīng)用于食品和藥物樣品的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，所得回收率范圍為72％-120%。該策略具有靈敏度高，成本低，特異性較高，檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，并且在藥品質(zhì)量控制、醫(yī)療衛(wèi)生、食品安全等方面有較好的應(yīng)用潛能。⑵基于化學(xué)發(fā)光分析方法建立了一種利用雙位點(diǎn)分子識(shí)別模式檢測(cè)變異鏈球菌的新型分析策略。在這項(xiàng)工作中，替考拉寧作為一種新型的分子識(shí)別試劑，修飾在羧基化的磁性顆粒上用于識(shí)

5、別和捕獲變異鏈球菌。為了進(jìn)一步提高該策略的特異性，利用大鼠免疫球蛋白G2a能夠特異性結(jié)合變異鏈球菌細(xì)胞壁上G蛋白這一特點(diǎn)，我們?cè)诖笫竺庖咔虻鞍?G2a上標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶作為第二種分子識(shí)別試劑以及信號(hào)探針，然后通過(guò)采集磁性顆粒捕獲到的變異鏈球菌的化學(xué)發(fā)光信號(hào)來(lái)定量檢測(cè)樣品基質(zhì)中的變異鏈球菌。結(jié)果表明，變異鏈球菌在1×102-1×106 CFU ml-1范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度有著良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限為33 CFU mL-1(信噪比=3)。