TIPE2通過負(fù)性調(diào)控β-catenin信號抑制胃癌細(xì)胞遷移、侵襲的作用.pdf

1、目的：研究腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白8樣蛋白2（TNFAIP8L2）（TIPE2）是否可以通過下調(diào)β-catenin信號抑制胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲。
　　方法：將本室構(gòu)建的GFP標(biāo)記的AdVTIPE2及其空對照AdV腺病毒在293人胚腎細(xì)胞中擴(kuò)增后，用氯化銫（CsCl）密度梯度超速離心純化，并用有限稀釋法根據(jù)293細(xì)胞GFP的表達(dá)進(jìn)行腺病毒滴度測定。然后將AdVTIPE2、對照空病毒AdV用篩選的腺病毒最佳感染劑量10MOI分別感染AGS

2、（野生型p53）、HGC-27（突變型p53）兩種人胃癌細(xì)胞株，獲得AGS-AdVTIPE2（簡寫為AGS-TIPE2）vs AGS-AdV（簡寫為AGS-Mock）；HGC-27-AdVTIPE2（簡寫為HGC-27-TIPE2）vs HGC-27-AdV（簡寫為HGC-27-Mock）。運(yùn)用RT-PCR、Western blot方法檢測腺病毒介導(dǎo)的TIPE2基因在 AGS、HGC-27胃癌細(xì)胞中的表達(dá)。采用劃痕實驗、Transwel

3、l侵襲實驗檢測腺病毒介導(dǎo)的TIPE2過表達(dá)對AGS、HGC-27胃癌細(xì)胞體外遷移、侵襲的作用，并利用Western blot方法檢測TIPE2對胃癌細(xì)胞AKT-GSK3β-β-catenin軸相關(guān)蛋白包括p-AKT、AKT、p-GSK3β、GSK3β、β-catenin表達(dá)的影響，及進(jìn)一步用免疫熒光激光共聚焦手段分析TIPE2對胃癌細(xì)胞β-catenin的影響。
　　結(jié)果：1）獲得了高滴度的 AdVTIPE2及其對照空病毒 AdV

4、，其效價分別可達(dá)6.3X1010、1.2X1011 Tu/ml；2）腺病毒介導(dǎo)的TIPE2過表達(dá)能明顯抑制AGS、HGC-27人胃癌細(xì)胞的遷移（AGS-TIPE2較 AGS-Mock的相對遷移能力為64.8％；HGC-27-TIPE2較HGC-27-Mock的相對遷移能力為78.6%）、侵襲能力（AGS-TIPE2較AGS-Mock的相對侵襲能力為52.7%；HGC-27-TIPE2較HGC-27-Mock的相對侵襲能力為69.0%）；