USP14去泛素化vimentin及miR-320a下調(diào)USP14和vimentin來共同調(diào)節(jié)胃癌細胞的惡性行為.pdf

1、目的：
　　胃癌（Gastric cancer）是消化道的一種常見惡性癌癥，是世界上導致死亡的第三種癌癥。盡管近年來胃癌的診斷和治療得到了進一步的發(fā)展，但由于胃癌的轉(zhuǎn)移和再發(fā)風險比較高，胃癌的死亡率仍然很高。因此，研究胃癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移機制十分重要，并且缺乏有效的生物標志物檢測早期胃癌的發(fā)生及發(fā)展?，F(xiàn)代生物醫(yī)學研究利用血清蛋白抗原，致癌基因或基因家族通過先進的分子生物學技術(shù)，如微陣列、RNA-Seq等等，探究了許多潛在的胃癌生物標記

2、基因。近年來，vimentin在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）和癌癥生長轉(zhuǎn)移過程中起的重要作用受到越來越多的關(guān)注。本課題主要研究vimentin、USP14和miR-320a在胃癌細胞中的惡性行為，探究它們在胃癌中相互調(diào)節(jié)的網(wǎng)絡結(jié)構(gòu)，為胃癌的早期診斷和轉(zhuǎn)移治療提出一個新的思路。
　　方法：
　　首先應用RT-qPCR檢測胃癌組織中vimentin的表達水平，并研究vimentin在胃癌惡性行為中的作用。接著，我們尋找研究 vimen

3、tin在胃癌組織和正常癌旁組織之間表達差異的影響機制及其對胃癌細胞惡性行為的影響，運用泛素化和免疫共沉淀實驗（Co-IP）來探究 vimentin表達水平增高的調(diào)節(jié)機制，發(fā)現(xiàn)USP14通過影響 vimentin的泛素化進而影響其在胃癌中的表達水平。然后，分別運用MTT、集落形成、遷移和侵襲實驗分別檢測USP14對胃癌細胞活力、細胞增殖能力、遷移和侵襲能力的作用，證實了USP14對胃癌細胞惡性行為的影響。此外，我們通過生物信息學預測分析發(fā)

4、現(xiàn) miR-320a可以同時靶定和下調(diào)vimentin和USP14，接著，我們又進一步研究了miR-320a對胃癌惡性行為的影響。最后，運用RT-qPCR檢測了USP14及miR-320a在胃癌組織及正常胃組織中差異性表達及相關(guān)性分析，闡明了 miR-320a可以通過對 vimentin和 USP14的調(diào)節(jié)作用來抑制胃癌的惡性行為。
　　結(jié)果：
　　RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn)胃癌組織與癌旁正常組織相比 vimentin的表達水平

5、顯著增高，MTT、集落形成、遷移和侵襲實驗表明 vimentin促進胃癌細胞的惡性行為。進一步的泛素化實驗和免疫共沉淀實驗證明了USP14與vimentin具有相互作用，并且USP14通過去泛素化vimentin來增加vimentin在胃癌細胞中表達水平。細胞表型實驗證明了 USP14也促進胃癌細胞的惡性行為。此外，發(fā)現(xiàn)miR-320a與 vimentin和 USP14的3’UTR具有特異性結(jié)合位點，并且發(fā)現(xiàn)miR-320a直接靶定和下

6、調(diào) USP14和 vimentin，并且通過細胞表型實驗證明了miR-320a在胃癌組織中具有抑癌作用。最后， RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中， miR-320a與USP14和vimentin均呈負相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：
　　胃癌組織中vimentin表達水平增高，并且vimentin可以促進胃癌細胞的惡性行為。進一步我們研究發(fā)現(xiàn)USP14可以通過去泛素化vimentin來增加其在胃癌細胞的表達水平。此外，我們發(fā)現(xiàn)了mi