SDF-1對(duì)低氧誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：采用三氣培養(yǎng)箱建立神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)低氧損傷模型，觀察基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)是否對(duì)低氧誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡有保護(hù)作用，探討SDF-1是否能通過(guò)結(jié)合CXCR4受體拮抗低氧處理下神經(jīng)干細(xì)胞的凋亡。
　　方法：采用小鼠C17.2神經(jīng)干細(xì)胞系作為研究對(duì)象，用三氣培養(yǎng)箱模擬低氧環(huán)境，建立NSCs低氧損傷模型。第一部分：實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組和低氧處理組；在0h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)分別運(yùn)用噻唑藍(lán)（MTT）比色法觀察低

2、氧處理對(duì)NSCs的損傷，探討低氧對(duì)NSCs影響的適宜時(shí)間。在0h、24h、48h時(shí)間點(diǎn)用吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）熒光雙染法,顯微鏡觀察低氧狀態(tài)下細(xì)胞凋亡及形態(tài)學(xué)變化。用Western Blot檢測(cè)HIF-1α的表達(dá)。第二部分：實(shí)驗(yàn)分為低氧培養(yǎng)組、SDF-1處理組，用MTT比色法檢測(cè)SDF-1處理下低氧處理NSCs的存活率。第三部分：實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、低氧對(duì)照組、低氧+SDF-1處理組、低氧+SDF-1+AMD3100組(CXCR

3、4阻斷劑)、低氧+AMD3100組，利用Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞CXCR4、bax、bcl-2蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：第一部分，a. NSCs的存活率與形態(tài)：24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)低氧處理組比正常組存活率低(P<0.05)。顯微鏡下可見(jiàn)低氧培養(yǎng)組神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量較正常對(duì)照組明顯減少，并可觀察到晚期凋亡細(xì)胞。低氧培養(yǎng)72h組細(xì)胞存活率較低,低氧培養(yǎng)48h組比低氧培養(yǎng)24h組細(xì)胞凋亡較多,細(xì)胞活性較好,為實(shí)驗(yàn)的最適宜

4、時(shí)間。
　　b. HIF-1α蛋白的表達(dá):低氧培養(yǎng)24h組較正常組表達(dá)升高(P<0.05)，低氧培養(yǎng)48h組較正常組表達(dá)明顯升高(P<0.05)；
　　第二部分， NSCs的存活率：在低氧培養(yǎng)24h、48h條件下，加入SDF-1處理的低氧培養(yǎng)組與未加SDF-1的對(duì)照組相比較，細(xì)胞存活率均明顯升高（P<0.05）。
　　第三部分，各組細(xì)胞CXCR4、bax、bcl-2蛋白的表達(dá):
　　CXCR4蛋白:低氧組CXCR

5、4蛋白的表達(dá)較正常對(duì)照組降低(P<0.05)，低氧+SDF-1處理組表達(dá)組比低氧組升高(P<0.05)。
　　bcl-2蛋白：低氧+SDF-1處理組較低氧組bcl-2蛋白表達(dá)升高(P<0.05)，低氧組bcl-2蛋白的表達(dá)較正常對(duì)照組降低(P<0.05)。
　　bax蛋白：低氧+SDF-1處理組較低氧組bax蛋白的表達(dá)降低(P<0.05)，低氧組bax蛋白的表達(dá)較正常對(duì)照組升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：SDF-1可