14-3-3η介導黃芪甲苷抗心肌細胞缺氧-復氧損傷的保護機制研究.pdf

1、目的:
　　黃芪甲苷（As-IV）是黃芪中的一種小分子的活性三萜皂苷成分，目前，已經(jīng)證明對許多心血管疾病有保護作用。本實驗主要目的是研究As-IV在抗心肌缺氧/復氧損傷中的作用機制，以闡明As-IV對抗心肌缺氧/復氧損傷的保護作用主要是否通過14-3-3η蛋白介導。
　　方法:
　　在本實驗中，大鼠H9c2心肌細胞作為實驗載體，通過體外心肌細胞缺氧/復氧(A/R)損傷模型模擬體內心肌缺血再灌注（I/R）損傷模型。實驗隨

2、機分成7組，每組重復4次：
　?。?）正常組（control組）；
　　（2）A/R組；
　?。?）25μM AS-IV+A/R組；
　?。?）50μM AS-IV+A/R組；
　?。?）100μM AS-IV+ A/R組；
　?。?）50μM As-IV+AD14-3-3ηRNAi+A/R組；
　?。?）50μM As-IV+ADscrRNAi+A/R組。
　　MTS法檢測細胞存活率；分

3、光光度法檢測LDH活性；蛋白免疫印跡法（western blotting）檢測14-3-3η蛋白的表達；JC-1檢測細胞線粒體膜電位(Δψm)；DCFH-DA法檢測心肌細胞內ROS水平；Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡。
　　結果：
　　1.與A/R組比較，As-IV預處理大鼠H9c2心肌細胞可減少LDH釋放，降低LDH活性（P＜0.05），增加細胞存活率（P＜0.05）；
　　2.蛋白免疫印跡法實

4、驗結果表明，50μM As-IV預處理可使14-3-3η蛋白的表達量增加（P＜0.05）；
　　3.流式檢測結果表明，50μM As-IV預處理大鼠H9c2心肌細胞可使細胞內活性氧水平降低，細胞線粒體膜電位穩(wěn)定，心肌細胞凋亡減少（P＜0.01）；
　　4.腺病毒14-3-3ηRNAi可以取消或減弱上述As-IV所產生的心肌保護作用。
　　結論：
　　As-IV可以增加14-3-3η蛋白的表達量，由14-3-3η蛋