let-7f-5p通過FNDC3B和MMP11抑制胃癌的轉移.pdf

1、【背景】
　　我國是胃癌高發(fā)區(qū)，在我國胃癌的發(fā)病率和死亡率在所有腫瘤中均居第二位，數據顯示新發(fā)腫瘤患者中有74％發(fā)生在亞洲，其中約半數發(fā)生在我國。胃癌的死亡率一直居高不下，其中胃癌轉移是導致胃癌患者死亡和治療失敗的主要原因，而轉移的分子機制尚不清楚。本實驗室前期通過研究對兩株轉移能力不同的胃癌轉移細胞系進行microRNA芯片分析，發(fā)現多個可抑制胃癌轉移的miRNA，其中以let-7f抑制胃癌轉移作用最為顯著。
　　【目的】

2、
　　研究let-7f-5p與胃癌轉移之間的關系；篩選并驗證let-7f-5p的下游靶基因；探究let-7f-5p靶基因與胃癌轉移的關系。
　　【方法】
　　1、通過qRT-PCR的方法檢驗let-7f-5p在胃癌細胞中的表達，轉染let-7f-5p的類似物及抑制物通過transwell實驗檢驗let-7f-5p對胃癌轉移的影響；
　　2、通過生物信息學預測的方法預測 let-7f-5p的靶基因，并運用qRT-P

3、CR、雙熒光素酶報告基因實驗及Western blot實驗驗證let-7f-5p與其靶基因的調控關系；
　　3、通過免疫組化和實時熒光定量PCR實驗驗證let-7f-5p靶基因在胃癌及癌旁組織之間的表達，通過轉染靶基因的小干擾RNA對靶基因進行功能研究，通過Western blot檢驗干擾let-7f-5p靶基因對其他重要分子通路蛋白水平的影響。
　　【結果】
　　一，let-7f-5p與胃癌轉移成負相關關系。我們在胃

4、癌高低轉移細胞系MKN28M、MKN28NM中驗證了let-7f-5p在胃癌高轉移細胞系中低表達，在胃癌低轉移細胞系中高表達；在高轉移細胞系MKN28M中轉染let-7f-5p的類似物使其上調，在低轉移細胞系MKN28NM細胞系中轉染let-7f-5p的抑制物使let-7f-5p下調，通過tanswell遷移和侵襲實驗發(fā)現let-7f-5p與胃癌細胞的遷移能力和侵襲能力呈負相關關系。
　　二，FNDC3B和MMP11為let-7f

5、-5p的靶基因，且let-7f-5p與 FNDC3B mRNA的3’-UTR直接結合。我們通過生物信息學預測的方法使用4個生物信息學預測軟件（CLIP-Seq, miRanda, PicTar和TargetScan）預測let-7f-5p的靶基因，發(fā)現FNDC3B與MMP11的3’-UTR上有與let-7f-5p結合位點，而且通過文獻回顧發(fā)現FNDC3B與MMP11與轉移相關；我們通過雙熒光素酶報告基因實驗和 Western blot驗

6、證了let-7f-5p通過與FNDC3B mRNA的3’-UTR直接結合從而下調FNDC3B，通過Western blot驗證了MMP11可能為let-7f-5p的下游靶基因。
　　三，FNDC3B可抑制胃癌的粘附、轉移，且其可影響EMT分子和MMP家族的表達。我們使用小干擾RNA技術使FNDC3B下調，通過細胞粘附實驗和transwell實驗發(fā)現下調FNDC3B的表達可抑制胃癌細胞的粘附、遷移和侵襲能力，通過western bl

7、ot實驗發(fā)現下調FNDC3B可抑制MMP分子的表達，同時下調FNDC3B可上調viminten的表達。
　　【結論】
　　1,let-7f-5p的表達與胃癌轉移負相關。
　　2,FNDC3B和MMP11是let-7f-5p的靶基因，而且let-7f-5p通過與FNDC3B的3’-UTR區(qū)直接結合從而下調FNDC3B的表達。
　　3,下調FNDC3B的表達可抑制胃癌的粘附、遷移和侵襲能力，且下調FNDC3B可抑制M