HBV mRNA通過抑制let-7a促進肝癌的發(fā)生.pdf

1、肝細胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是全世界發(fā)病率位列第五的癌癥。乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)慢性感染是肝癌發(fā)生的一個主要的病因，研究發(fā)現(xiàn)病毒蛋白因子（如病毒X蛋白HBx、S蛋白HBs等）、慢性炎癥、病毒基因整合到宿主染色體等均可誘導HCC發(fā)生，HBV慢性感染引發(fā)HCC的機制仍有待深入研究，這對于發(fā)現(xiàn)治療乙肝慢性感染引起的肝細胞癌的新靶標具有重要意義。近期我們提出了競爭性病毒RNA

2、s(competitivevirusRNAs，cvRNAs)的概念:HBVmRNAs和宿主mRNAs之間擁有共同的miRNA結(jié)合序列，HBVmRNAs通過共享的miRNA反應元件與相應的宿主mRNAs競爭性結(jié)合感染細胞中的miRNAs池，導致HBVmRNAs可能直接調(diào)控相應宿主mRNAs的水平。鑒于HBV感染過程中通常通過共價閉合環(huán)狀DNA(covalentlyclosedcircularDNA，cccDNA)表達大量冗余的mRNA，預

3、期病毒與宿主細胞mRNA之間存在直接調(diào)控關(guān)系，這可能在HCC發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。
　　本研究中，主要探討大量表達的HBVmRNAs能否通過調(diào)節(jié)共享的miRNA，上調(diào)宿主中具有相同miRNA結(jié)合位點的基因的表達，分析該過程是否參與HCC的發(fā)生。Let-7a是高度保守的let-7家族成員之一，我們選擇let-7a是因為它是肝臟中預測的同時靶向C型和D型HBV轉(zhuǎn)錄本的宿主miRNAs中豐度最高的miRNA之一，而且它在HBV相關(guān)的

4、肝細胞癌中水平顯著下調(diào)。首先，通過基因表達譜分析HBVmRNA調(diào)節(jié)的miRNAs及宿主mRNA表達譜，我們發(fā)現(xiàn)HBVpre-C/CmRNA上調(diào)多種let-7a靶點。隨后，通過軟件預測發(fā)現(xiàn)在HBVpre-C/C、pre-S和SmRNAs的第86至108位堿基處有一個let-7a的結(jié)合位點，并通過結(jié)合位點突變實驗和雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)加以證實。在HBV轉(zhuǎn)染和感染的肝細胞中，發(fā)現(xiàn)HBVmRNAs對let-7a的隔離和抑制作用，而且在HB

5、V感染的單個肝細胞中HBVmRNA水平遠高于let-7a的水平，提示病毒mRNA可有效作用于let-7a，而且HBVmRNAs對let-7a的這一作用依賴于let-7a反應元件。進一步的機制研究發(fā)現(xiàn)一旦病毒mRNA表達，與AGO2結(jié)合的let-7a靶基因(例如c-myc、K-RAS和CCR7)顯著減少，提示let-7a對其靶基因及其信號通路的抑制作用也隨之解除。同時，在HBV感染的HCC患者中也發(fā)現(xiàn)let-7a的水平不僅明顯下調(diào)，而且與

6、肝臟內(nèi)的pre-S2mRNA水平呈負相關(guān)。最后，體外和體內(nèi)實驗均證明HBV對let-7a的抑制作用可促進肝細胞克隆形成和肝腫瘤生長，這為查明HBVmRNAs直接參與致癌作用提供了依據(jù)。
　　綜上所述，我們的研究表明，HBVmRNAs通過let-7a反應元件依賴的模式吸附和隔離let-7a，從而解除let-7a對其靶基因(例如c-myc、K-RAS和CCR7)的抑制作用，進而在HCC發(fā)生發(fā)展中起著促進肝細胞惡性轉(zhuǎn)化和生長的作用。鑒于