Toll樣受體7激動劑T7-利尿酸偶合物聯(lián)合ROR1抗乳腺癌作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討Toll樣受體7激動劑T7-利尿酸偶合物(T7-EA)聯(lián)合受體酪氨酸激酶樣孤兒受體1（ROR1）抗乳腺癌的作用。
　　方法：采用Syfpeithi表位預(yù)測軟件預(yù)測ROR1的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）的表位；ELISA檢測不同濃度的T7-EA（0、0.01、0.1、0.5、1、2、4、8、16、20、24μmol/L）誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子γ干擾素（IFN-γ）和白細(xì)胞介素12（IL-12）的水平； ELISA檢測

2、4μmol/L T7-EA、4μmol/L ROR1和4μmol/L T7-EA聯(lián)合4μmol/L ROR1分別誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞和骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(DC)產(chǎn)生的細(xì)胞因子IFN-γ、IL-12和腫瘤壞死因子α（TNF-α）；BALB/c小鼠皮下接種乳腺癌4T1細(xì)胞建立移植瘤模型，腹腔分別注射3 mg/kg T7-EA,15 mg/kg ROR1，3 mg/kg T7-EA聯(lián)合15 mg/kg ROR1，每周1次，免疫治療4次后處死小

3、鼠檢測腫瘤重量；乳酸脫氫酶(LDH)法測定特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的活性；ELISA檢測血清中針對4T1細(xì)胞腫瘤蛋白的IgG水平。
　　結(jié)果：在預(yù)測的多條ROR1 CTL表位肽中選取序列PYCDETSSV作為疫苗多肽；體外實(shí)驗(yàn)顯示T7-EA活化淋巴細(xì)胞呈現(xiàn)劑量依賴性，與ROR1相關(guān)多肽混合后不改變其活性；T7-EA與ROR1合用誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和IL-12，刺激DC產(chǎn)生TNF-α；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示 T7-EA