Egfl8調(diào)控肝癌侵襲轉移的機制研究.pdf

1、肝細胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是臨床上常見的惡性腫瘤之一，已成為全球第六大常見和第二大致死率的惡性腫瘤，其在我國則為第三大常見的惡性腫瘤，嚴重威脅我國人民的生命健康。盡管現(xiàn)階段肝癌手術切除率已明顯提高，但以5年生存率衡量，肝細胞癌的整體治療水平仍無顯著改善。究其原因，主要在于肝細胞癌術后的高復發(fā)轉移率。顯然，抑制肝癌的侵襲轉移能力以降低肝癌術后的高復發(fā)轉移率是目前肝癌治療面臨的重點和關鍵問題。

2、>　　經(jīng)過幾十年的研究，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)nm23，KAI-1，OPN等一批在HCC侵襲轉移中發(fā)揮重要作用的因子。我們前期的研究也已發(fā)現(xiàn) Egfl7可通過 Egfl7/EGFR/FAK信號通路促進HCC的侵襲轉移能力。Egfl8（epidermal growth factor-like domain8，表皮生長因子樣結構域8）是Egfl7的同源基因，兩者均為Egfl基因家族成員。Egfl8基因編碼蛋白與Egfl7編碼基因蛋白具有極為相似的蛋白質(zhì)結

3、構，兩者均是分泌型蛋白，都包含有一個 EGF樣結構域，一個鈣離子結合型 EGF樣結構域和 N尾端的信號肽。因此我們認為兩者蛋白質(zhì)結構上的一致性強烈提示 Egfl8可能和 Egfl7一樣在人類惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。近年來我們已證實 Egfl8在人結直腸癌及胃癌組織中的表達明顯下調(diào)，且其低表達與結直腸癌及胃癌的遠處轉移、TNM分期及不良預后密切相關。但 Egfl8在 HCC組織中的表達水平及其功能目前尚未見研究報道。
　　目的

4、:分析 Egfl8在 HCC組織、肝癌細胞系中的表達水平及其與 HCC臨床病理特征的相關性，并進而研究Egfl8在肝癌細胞的增殖、凋亡、侵襲及運動能力等方面的作用。
　　方法:收集34例手術切除的新鮮肝癌標本及其對應的癌旁正常肝臟組織標本，采用實時熒光定量PCR方法檢測Egfl8基因在這些組織標本、正常肝細胞系及3腫肝癌細胞系中的表達水平，并分析 Egfl8基因表達水平與 HCC各項臨床病理特征之間的相關性。進而，我們采用慢病毒介

5、導的基因轉導技術，構建Egfl8過表達的HCCLM3肝癌細胞，以Western blot法檢測 Egfl8蛋白表達水平的變化，并分別采用 MTT法、Annexin V-APC染色法、Transwell侵襲小室法及劃痕實驗觀察該細胞在增殖、凋亡、侵襲及運動能力等方面的變化。
　　結果:實時熒光定量PCR結果顯示，Egfl8基因在67.6％（23/34）的肝癌組織中表現(xiàn)為低表達，且 Egfl8在癌組織中的表達高于癌旁組織（0.008±

6、0.02比0.194±0.05，P=0.04）。同時，Egfl8表達下調(diào)與肝癌的靜脈侵犯（P=0.01）及TNM分期（P=0.00）密切相關。此外，Egfl8在肝癌細胞系中的表達水平也明顯低于正常肝細胞系（P<0.05），且其在高侵襲轉移潛能肝癌細胞系中的表達低于低侵襲轉移潛能的肝癌細胞系（P<0.05）。慢病毒介導的基因轉導技術成功構建了Egfl8過表達的HCCLM3肝癌細胞，過表達組細胞中Egfl8蛋白的表達水平較對照組明顯上升（0

7、.853比0.254，P<0.001）。與對照組細胞相比。Egfl8過表達組肝癌細胞的凋亡率明顯上升（10.05±0.26%比7.28±0.31%，P<0.001），細胞侵襲能力（Transwell小室轉移率：1.815±0.019比3.732±0.061，P<0.001）和遷移能力均明顯降低（24h遷移率：0.03±0.00比0.17±0.04，P=0.021；72h遷移率：0.23±0.03比0.36±0.05，P=0.028），提

8、示過表達 Egfl8基因可抑制肝癌細胞的侵襲轉移。而MTT法描繪的增殖曲線則顯示，Egfl8過表達組 HCCLM3細胞的增殖無顯著變化，提示Egfl8基因對肝癌細胞的增殖無明顯影響。
　　結論:Egfl8在HCC組織及肝癌細胞系中表達下調(diào)，其表達下調(diào)與肝癌的惡性程度及侵襲轉移潛能密切相關。Egfl8的過表達促進了肝癌細胞的凋亡，抑制了肝癌細胞的侵襲及遷移能力，而對其增殖能力無明顯影響，提示 Egfl8可作為一種反映 HCC惡性程度