細胞因子誘導的殺傷細胞輸入治療惡性腫瘤的臨床研究.pdf

1、目的：細胞因子誘導的殺傷（Cytokine induced killer，CIK）細胞治療是生物治療方式之一。統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，不同臨床研究應用CIK細胞輸入治療惡性腫瘤時適應癥選擇較為廣泛、細胞治療介入時間不同、細胞輸入劑量差異較大，有效細胞數(shù)比例差異較大，因此臨床治療效果也有一定的差異。為此，本研究篩選幾種臨床應用報道較為有效的適應癥，以患者標準化療結束2個月后為介入時間，通過分離惡性實體瘤患者的外周血單個核細胞（Peripheral bl

2、ood mononuclear cell，PBMNC），以干擾素-γ（Interferon-γ，INF-γ）、anti-CD3單克隆抗體（monoclonal antibody，Mab）、anti-CD28Mab、白細胞介素2（Interleukin-2，IL-2）分步誘導、擴增獲得CIK細胞，驗證該培養(yǎng)體系的可靠性，分析CIK細胞產(chǎn)量與采血前患者的白細胞計數(shù)、淋巴細胞計數(shù)，采血量及分離獲得的初始PBMNC數(shù)量之間的關系，探討在既定的制

3、備方法下對CIK細胞產(chǎn)量影響最大的初始條件，從而保證相對穩(wěn)定的CIK細胞產(chǎn)量。并且通過CIK細胞輸入治療，以卡氏（Karnofsky，KPS）評分考察患者生存質量，根據(jù)實體瘤療效評價標準以客觀緩解率（Objective response rate，ORR）和臨床獲益率（Clinical benefic rate，CBR）、無進展生存期（Progression free survival， PFS）和總生存期（Overall surviv

4、al，OS）考察對患者的治療作用，探討該方案的臨床治療效果。
　　方法：
　　1、患者納入和治療方案
　　本研究納入41例化療結束后2個月的臨床療效評價為疾病穩(wěn)定（Stable disease，SD）、部分緩解（Partial response，PR）、完全緩解（Complete remission，CR）的非疾病進展（progress-free direase，PD）惡性實體瘤患者，其中接受 CIK細胞輸入治療的22

5、例患者為 CIK組，19例為對照組，兩組患者性別、年齡、體重、腫瘤分期、疾病狀態(tài)等一般資料相比沒有統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。CIK組患者共進行連續(xù)3個療程的輸入治療，每月1個療程。每個療程采血1次，連續(xù)回輸細胞3次（次/天）。
　　2、 CIK細胞培養(yǎng)與回輸
　　CIK組采集患者外周血60-120mL；以密度梯度離心法分離獲得PBMNC；以INF-γ、anti-CD3Mab、anti-CD28Mab、IL-2分步誘導、擴增

6、CIK細胞；細胞培養(yǎng)至14、15、16天，分別制備CIK細胞制劑；質檢結果合格后回輸患者體內。
　　3、療效評價
　　本研究考察兩組患者化療結束后2個月、4個月、6個月、12個月四次隨訪的臨床療效，若患者出現(xiàn)PD、死亡則隨訪終止。生存質量（Quality of life，QOL）以KPS評分進行評價，分別比較對照組與CIK組前兩次隨訪的KPS評分；以及CIK組第1療程結束后第3天、7天、15天與CIK組前兩次隨訪的KPS評分

7、。根據(jù)實體瘤療效評價標準，分別比較對照組與CIK組4次隨訪時的ORR和CBR，并評估患者的PFS和OS，以此評價患者臨床療效。
　　結果：
　　1、 CIK細胞培養(yǎng)
　　所有樣本支原體檢定、無菌檢定結果均為陰性，無污染發(fā)生。CIK細胞制劑內毒素檢定均合格。細胞表型流式結果：CD3+CD56+（27.02±3.58）％。
　　2、 CIK細胞總量與白細胞計數(shù)、淋巴細胞計數(shù)、采血量及初始PBMNC數(shù)量之間的關系

8、>　　本研究共計采集外周血樣本66份。采血前收集的白細胞計數(shù)（×109/L）、淋巴細胞計數(shù)（×109/L）平均值分別為：6.74±4.27、1.68±0.52；采血量（mL）及初始PBMNC數(shù)量（×106）平均值分別為：68.94±14.37、101.64±21.48；CIK細胞總量（×109）平均值10.43±2.16。Pearson相關性檢測結果表明，CIK細胞總量與PBMNC數(shù)量正相關性最高（R=0.804，P＜0.0001）。線

9、性回歸方程為y=0.080x+2.233（y為CIK細胞數(shù)量（×109）， x為PBMNC數(shù)量（×106））。
　　3、不良反應
　　本研究共實施細胞輸入操作198次，回輸過程中沒有發(fā)生惡心、嘔吐、頭暈等不良反應；4例患者在第1次回輸后24h內低燒，2例口干，后很快自行緩解；沒有出現(xiàn)皮疹、休克、栓塞、肝腎損傷等嚴重副作用；沒有終止治療或放棄治療的現(xiàn)象。
　　4、患者QOL評價
　　以KPS評分評價患者QOL。第一

10、次隨訪患者納入分組，對照組與CIK組KPS評分分別為50.53±10.79和56.82±16.44，統(tǒng)計學比較無顯著性差異（P＞0.05）。第二次隨訪CIK組患者已完成兩個療程的細胞輸入治療，對照組與CIK組KPS評分分別為44.74±22.70和70.45±15.88，對照組KPS評分顯著低于CIK組（P＜0.05）。CIK組第1療程細胞回輸結束后第3天、7天、15天KPS評分分別為57.27±14.86、63.64±16.20和64

11、.09±15.32，呈逐漸升高的趨勢，但差異不明顯（P＞0.05）。CIK組前兩次隨訪期間內KPS評分呈逐漸升高的趨勢，第二次隨訪患者的KPS評分顯著高于第一次隨訪和第1療程細胞回輸結束后第3天時的KPS評分（P＜0.05）。
　　5、臨床療效評價
　　兩組患者在隨訪過程中均逐漸出現(xiàn)PD和死亡病例。統(tǒng)計比較每次隨訪時對照組與CIK組的ORR與CBR，結果表明：兩組患者的ORR與CBR均隨著時間的延長呈下降趨勢，CIK組隨著治

12、療的進行ORR與CBR均優(yōu)于對照組，但無顯著性提高（P＞0.05）。隨訪期內對照組與CIK組1年存活率分別為68.4%和77.3%，CIK組1年存活率略高于對照組，但沒有統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。對照組與CIK組患者的PFS平均值分別為7.74±4.28（月）和9.91±2.67（月），OS平均值分別為9.95±2.81（月）和11.09±1.40（月），經(jīng)log-rank法比較均無顯著性差異（P＞0.05）。結論：
　　1、