腎纖康通過Wnt-β-catenin信號通路調(diào)控TGF-β1誘導的腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的研究.pdf

1、目的：探討中藥腎纖康基于Wnt/β-catenin信號通路對TGF-β1(transforminggrowth factor beta1，TGF-β1)誘導的腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的作用及機制。
　　方法：選用為正常大鼠近端腎小管上皮細胞(NRK-52E)，離體培養(yǎng)并采用隨機數(shù)字法將細胞分為5個組:對照組（C組）:在培養(yǎng)基中加入10％正常大鼠血清;TGF-β1組（T組）:在培養(yǎng)基中加入10％正常大鼠血清+TGF-β1（10ng/ml

2、）;腎纖康低濃度組（L組）:在培養(yǎng)基中加入5％中藥大鼠血清+5％正常大鼠血清+TGF-β1（10ng/ml）;腎纖康高濃度組（H組）:在培養(yǎng)基中加入10％中藥大鼠血清+TGF-β1（10ng/ml）;貝那普利陽性對照組（B組）:在培養(yǎng)基中加入10％西藥大鼠血清+TGF-β1(10ng/ml)。藥物作用72小時后，運用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，細胞免疫熒光法、實時熒光定量PCR法(Q-PCR)、Western-blot檢測各組細胞a-平

3、滑肌肌動蛋白（a-smooth muscle actin，α-SMA）、E-鈣粘素(E-cadherin)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、Wnt4的表達。使用統(tǒng)計軟件SPSS19.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：⑴C組細胞形態(tài)為典型多邊形、卵圓形的鋪路石樣特征;T組細胞形態(tài)拉長成為梭形，向肌成纖維細胞方向轉(zhuǎn)化;L組大部分細胞形態(tài)為梭形;H、B組細胞僅部分形態(tài)為梭形，大部分細胞外觀為多邊形、卵圓形鋪路石樣。⑵C組細胞胞質(zhì)中未

4、見α-SMA表達，胞核中無β-catenin陽性表達，Wnt4胞膜上少量表達，胞質(zhì)中大量表達E-cadherin，T組與C組比較α-SMA、β-catenin以及Wnt4的表達增加(P＜0.05)，E-cadherin表達減少(P＜0.05);H組、B組及L組與T組比較α-SMA、β-catenin以及Wnt4的表達減少(P＜0.05)，E-cadherin的表達增加(P＜0.05);H組、B組較L組α-SMA、β-catenin、Wn

5、t4表達減少和E-cadherin表達增加更為顯著(P＜0.05);B組與H組比較α-SMA、β-catenin、Wnt4、E-cadherin表達差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。⑶C組細胞中α-SMA、β-catenin、Wnt4 mRNA少量表達，E-cadherinmRNA大量表達。T組較C組α-SMA、β-catenin、Wnt4 mRNA表達明顯上調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin mRNA表達明顯下調(diào)(P＜0.05

6、)。L、H、B組較T組α-SMA、β-catenin、Wnt4 mRNA表達均下調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin mRNA表達均上調(diào)(P＜0.05);H組、B組較L組α-SMA、β-catenin、Wnt4 mRNA表達下調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin mRNA表達上(P＜0.05)，B組與H組比較各指標mRNA的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。⑷C組細胞中α-SMA、β-catenin、Wnt4蛋白少量表達，

7、E-cadherin蛋白大量表達。T組較C組α-SMA、β-catenin、Wnt4的蛋白表達上調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin蛋白表達下調(diào)(P＜0.05)。L、H、B組較T組α-SMA、β-catenin、Wnt4蛋白表達均下調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin蛋白表達均上調(diào)(P＜0.05)，H、B組與L組比較α-SMA、β-catenin、Wnt4蛋白表達均下調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin蛋白表達均上調(diào)(P＜0

8、.05)，H組與B組比較各指標蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：①TGF-β1可以誘導腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞，增加α-SMA的表達而減少E-cadherin的表達，使Wnt4和β-catenin的表達上調(diào)，激活Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導通路。②中藥腎纖康能夠抑制TGF-β1誘導的NRK-52E細胞轉(zhuǎn)分化，其抑制細胞轉(zhuǎn)分化的機制可能與其降低Wnt4和β-catenin的表達從而阻斷Wnt/β-c