Wnt-β-catenin信號在BCG誘導肺臟上皮細胞凋亡中的調控機制研究.pdf

1、結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)是引起肺臟結核(Tuberculosis)的一種通過空氣傳播的傳染性病原菌，在全球范圍內由其感染引發(fā)的傳染性死亡人數(shù)僅次于艾滋病。現(xiàn)今結核分枝桿菌在全球范圍內的傳播主要面對兩大問題:1、結核分枝桿菌與艾滋病共感染，成倍造成對人類健康更嚴重的威脅;2、多重耐藥性結核分枝桿菌病例數(shù)量增長影響治療。固有免疫和適應性免疫應答為機體對結核分枝桿菌免疫的兩種基本過程，以往研

2、究中認為巨噬細胞在對抗結核分枝桿菌的過程中行使主要作用，但現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)肺泡上皮細胞同樣是重要的、能夠行使免疫功能的細胞。Wnt信號通路是一條保守的信號通路，在細胞的增殖、分化、遷移和凋亡等多種過程中起作用，同時是機體發(fā)育調控也是免疫調控過程中的調控信號之一。細胞被結核分枝桿菌感染后通常會產(chǎn)生三種狀態(tài):凋亡、壞死和存活。凋亡和壞死作為兩種可觀察到死亡方式可以導致不同的結果:細菌引起的壞死有助于其逃離巨噬細胞和宿主免疫抵抗并傳播。凋亡使細胞保

3、持完整的膜結構而死，可以減少病原菌的存活率。越來越多的證據(jù)表明Wnt信號通過多種途徑影響細胞凋亡，其中Wnt/β-catenin信號和非Wnt/β-catenin信號都能夠影響細脆凋亡。本項目使用牛分枝桿菌卡介苗(BCG)感染人類肺泡上皮Ⅱ型細胞A549細胞系并通過抑制或激活Wnt/β-catenin信號來探究Wnt信號與病原微生物引發(fā)的細胞凋亡發(fā)生過程之間的關系以及具體作用機制，旨在探究肺臟上皮細胞中Wnt信號與凋亡信號之間的調控關系

4、。另可以對病原微生物引發(fā)的細胞凋亡調控機制研究提供一定的依據(jù)，此外還能對結核分枝桿菌診斷與治療的發(fā)展有所啟發(fā)。
　　通過本項目的研究，在除去驗證了課題組在過去得出的BCG對Wnt/β-catenin信號起到抑制炎癥反應作用以外，通過流式細胞技術和蛋白免疫雜交技術發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號可以調控BCG引起的cyclinD1和c-myc的表達量變化，降低細胞由BCG引起的凋亡率和ROS的產(chǎn)生。但在使用抑制劑的情況下Wnt/β

5、-catenin信號通路對BCG引起的細胞凋亡起促進作用。后對凋亡誘導因子(AIF)和促凋亡蛋白BAX的檢測中發(fā)現(xiàn)兩種蛋白的表達量變化符合Wnt/β-catenin信號通路的調控規(guī)律，并且在使用了Wnt/β-catenin信號通路抑制劑XAV939以及廣譜caspase抑制劑Z-vad處理實驗組之后兩種蛋白的表達情況依然符合Wnt/β-catenin信號通路的調控規(guī)律，同時自始至終并未觀察到caspase3蛋白的表達情況有符合規(guī)律的跡象

6、。故本實驗共得到三個主要結果，即，在本實驗條件下:1、Wnt/β-catenin信號對BCG引起的A549細胞的凋亡表現(xiàn)為雙向調控。2、Wnt/β-catenin信號對BCG引起的細胞凋亡的調控不依賴caspase3、Wnt/β-catenin信號通過凋亡誘導因子(AIF)-Bcl2相關蛋白X(BAX)通路來對BCG引起的凋亡進行抑制。此外還通過實驗中呈現(xiàn)的規(guī)律大膽推斷，在本實驗條件下:1、在細胞穩(wěn)定自身活性氧水平的過程中有可能存在AI