Transgelin基因在肺腺癌發(fā)展中的作用研究.pdf

1、背景和目的：
　　肺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類健康和生命。由于其起病隱匿，多數(shù)患者就診時已屬中晚期，僅能進行姑息治療，預后較差，生存時間很短，總的5年生存率約10％-15％。因此迫切需要尋求新的早期診斷標志物和有效的治療方法。近年來，國內外許多專家學者從基因水平探索肺癌發(fā)生、發(fā)展的機制，從而對相關基因及其表達產物進行干預將有可能為肺癌的診治開辟一個新的領域。
　　轉膠蛋白(Transgelin)是肌動蛋白結合

2、蛋白，屬于鈣調節(jié)蛋白家族成員之一。一些研究表明，在肺癌、結直腸癌、肝癌及前列腺癌等惡性腫瘤中，均發(fā)現(xiàn)transgelin基因的表達上調，提示transgelin可能有促進這些腫瘤生長的作用，
　　本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)，transgelin的表達水平在人非小細胞肺癌細胞中表達升高，提示transgelin在肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起了重要作用。本研究以慢病毒為載體，干擾transgelin在人肺腺癌細胞A549中的表達，建立trans

3、gelin穩(wěn)定沉默的細胞株，觀察其在裸鼠肺腺癌皮下移植瘤的生長情況，探討transgelin在肺腺癌細胞中的體內生物學效應。同時應用組織芯片和免疫組化相結合方法進一步檢測transgelin在肺腺癌組織、癌旁組織中的表達情況，同時分析transgelin的表達與肺腺癌臨床分期、淋巴結轉移等臨床病理特征的相關性。因此，干擾transgelin基因的表達可望成為肺癌治療的一個有效靶點。
　　方法：
　　構建Transgelin

4、shRNA慢病毒載體，將其轉染入人肺腺癌A549細胞中，并采用Real-Time PCR、 Western blot法檢測轉染前后trangelin表達變化。成功建立皮下移植瘤模型18只，按皮下注射細胞不同分為3組:(1)慢病毒轉染transgelin shRNA的A549細胞（實驗組）(2)慢病毒轉染無關序列的A549細胞（陰性載體對照組）(3)未轉染任何載體的A549細胞（空白對照組）。每5天測量腫瘤大小，第30天處死所有裸鼠，計算

5、腫瘤體積，治療前后裸鼠體重變化及抑瘤率。留取組織標本，免疫組化法檢測transgelin和增殖細胞核抗原(PCNA)蛋白在皮下移植瘤組織中的表達情況。將具備完成臨床資料的75例肺腺癌的癌組織標本及相應的癌旁組織制成150點組織芯片，應用免疫組化方法檢測transgelin在肺腺癌組織、癌旁組織中的表達情況，同時分析transgelin的表達與肺腺癌臨床分期、淋巴結轉移等臨床病理特征的相關性。
　　結果：
　　(1)三組裸鼠皮

6、下均出現(xiàn)皮下移植瘤，成瘤率為100％。與陰性載體對照組和空白對照組相比，實驗組裸鼠皮下移植瘤瘤體積生長速度明顯緩慢，體積顯著小，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，體積抑瘤率達69.2％。與陰性載體對照組和空白對照組相比，實驗組腫瘤重量明顯減輕，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，瘤重抑瘤率達75％。
　　(2)實驗組transgelin蛋白表達水平明顯低于陰性載體對照組及空白對照組，模型構建成功。同時PCNA蛋白水平顯著低于陰性載體

7、對照組及空白對照組。
　　(3)免疫組化結果顯示癌組織中transgelin蛋白陽性表達率68％(51/75)，高于癌旁組織中表達的40％(30/75)(p=0.001，x2=11.836)。
　　(4) Transgelin的表達在(Ⅰ+Ⅱ)期與(Ⅲ+Ⅳ)期間的表達差別有統(tǒng)計學意義(x2=6.117，p＜0.023);在有淋巴結轉移組與無淋巴結轉移組間的表達差別有統(tǒng)計學意義(x2=5.672，p＜0.025);在（高+中）

8、分化組與低分化組間的表達差別有統(tǒng)計學意義(x2=6.63，p＜0.014); Transgelin蛋白的高表達與性別、年齡、腫瘤大小無關（p值均＞0.05）。
　　結論:：
　　利用慢病毒transgelin shRNA載體干擾transgelin基因表達能有效抑制人肺腺癌A549在裸鼠腫瘤體積的生長，其中可能的一種機制是抑制PCNA蛋白表達，即抑制裸鼠體內細胞的增殖有關。同時肺腺癌組織中transgelin蛋白表達水平明顯