臍帶血造血干細(xì)胞衍生的Langerhans細(xì)胞對(duì)戶塵螨的識(shí)別和應(yīng)答.pdf

1、特應(yīng)性皮炎(Atopic dermatitis，AD)是一種慢性、復(fù)發(fā)性、炎癥性皮膚病，主要表現(xiàn)為劇烈的瘙癢、濕疹樣皮損和皮膚干燥。AD的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，目前認(rèn)為AD發(fā)病與遺傳背景、環(huán)境因素刺激、皮膚屏障功能障礙、免疫應(yīng)答異常以及菌群失調(diào)有關(guān)，其中異常的皮膚屏障功能和免疫應(yīng)答是AD發(fā)病的核心環(huán)節(jié)。
　　約60％的AD患者血清中具有增高水平的特異性IgE（Specific IgE，sIgE），其中戶塵螨1類(lèi)變應(yīng)原（Dermatop

2、hagoides pteronyssinus allergen1，Der p1）和戶塵螨2類(lèi)變應(yīng)原（Dermatophagoides pteronyssinus allergen2，Der p2）是主要變應(yīng)原[1]。塵螨過(guò)敏患者中血清Der p1sIgE陽(yáng)性率為93％，Der p2 sIgE陽(yáng)性率為77％[2]。但戶塵螨sIgE如何產(chǎn)生、以及如何參與AD發(fā)病的機(jī)制尚未闡明。
　　在皮膚屏障功能破壞的基礎(chǔ)上，經(jīng)皮致敏(epicuta

3、neous sensitization，ES)是AD的一個(gè)重要特點(diǎn)。在經(jīng)皮致敏過(guò)程中，朗格漢斯細(xì)胞(Langerhans cells，LCs)扮演重要角色。研究發(fā)現(xiàn)，LCs可以介導(dǎo)AD小鼠模型的經(jīng)皮致敏，在TSLP存在下，導(dǎo)致IgE的產(chǎn)生而參與AD發(fā)病[3]。然而，LCs感知外源過(guò)敏原的受體機(jī)制尚不明確。LCs細(xì)胞上表達(dá)有大量的Langerin受體，Langerin是一種特異性表達(dá)于LCs表面的C型凝集素受體，可識(shí)別葡聚糖、巖藻糖和N-

4、乙酰葡糖胺等糖基。本研究組前期研究利用ELISA和轉(zhuǎn)染Langerin的HEK293T細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，Langerin可以識(shí)別塵螨等過(guò)敏原[4]，但Langerin識(shí)別塵螨抗原后所介導(dǎo)的LCs的應(yīng)答機(jī)制不明確。
　　目的:
　　(1)研究AD患者病情嚴(yán)重程度和戶塵螨sIgE水平的相關(guān)性。
　　(2)建立體外誘導(dǎo)LCs的培養(yǎng)體系，并觀察LCs表型特點(diǎn)。
　　(3)檢測(cè)LCs通過(guò)Langerin對(duì)Der p2的識(shí)別、攝取及

5、LCs的活化成熟。
　　方法:
　　(1)篩選符合Hanifin&Rajika診斷標(biāo)準(zhǔn)的AD患者，采用歐洲AD特別工作組制定的SCORAD法對(duì)其病情嚴(yán)重度進(jìn)行評(píng)分，檢測(cè)戶塵螨sIgE水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;
　　(2)采集人外周血或臍帶血，磁珠分選單核細(xì)胞或造血干細(xì)胞并體外誘導(dǎo)，利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)細(xì)胞表面Langerin和CD1a的表達(dá);
　　(3)激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)造血干細(xì)胞誘導(dǎo)LCs表達(dá)的Langer

6、in受體對(duì)熒光標(biāo)記的Der p2的識(shí)別和攝取;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)衍生的LCs在Der p2刺激后表面活化標(biāo)記CD80、CD83、CD86、HLA-DR等的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)在戶塵螨sIgE陽(yáng)性患者中（Cut-off設(shè)定為＞0.70Ku/mL），SCORAD評(píng)分與戶塵螨sIgE水平顯著相關(guān)(P=0.005);
　　(2)利用外周血單核細(xì)胞和臍帶血造血干細(xì)胞，成功誘導(dǎo)了表達(dá)Langerin的LCs;