TET2在胃癌的表達與胃癌轉移、預后關系的研究.pdf

1、研究背景：
　　DNA胞嘧啶甲基化是指基因組特定區(qū)域生成5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5-mC)，是一種重要的表觀遺傳學修飾方式，在生物發(fā)育、基因組印跡和基因表達調控中發(fā)揮著重要的作用。5-mC可經TET(Ten-eleven translocation)蛋白家族羥化后生成5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5-hmC)，啟動DNA去甲基化過程。TET蛋白家族有3位成員，分別是TE

2、T1、TET2和TET3。TET蛋白氧化5-mC生成5-hmC，后者進一步被轉化為5-甲酰胞嘧啶（5-formylcytosine，5-fC）和（或）5-羥基胞嘧啶(5-carboxylcytosine，5-caC)。遺傳學研究表明TET蛋白家族成員通過修飾DNA去甲基化，在基因組DNA主動去甲基化過程中發(fā)揮重要作用。因此，TET蛋白家族參與生物生長發(fā)育，與多種疾病發(fā)生有密切關系。近年來，隨著對TET蛋白家族和5-hmC生物學功能的深入

3、認識，TET蛋白家族在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用亦受到重視。
　　胃癌起源于胃黏膜上皮，是危害人類健康的常見惡性腫瘤之一。胃癌的發(fā)生是一個多因素、多步驟的過程。胃癌發(fā)生與環(huán)境和飲食因素、幽門螺旋桿菌感染、遺傳因素等相關。近年來，胃癌發(fā)生過程中表觀遺傳學修飾所扮演的角色成為科研工作者研究的重點方向。雖然早有文獻表明，基因轉錄可以被異常甲基化作用，從而促進基因突變，增加染色體結構的不穩(wěn)定性等多重機制促進胃癌的發(fā)生發(fā)展，但是TET蛋白家族在胃

4、癌發(fā)生發(fā)展中的全面和確切的作用仍不清楚。本研究檢測TET蛋白家族成員在胃癌組織中的表達，探討其與胃癌進展的相關性，為進一步認識異常表觀遺傳事件促進胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機制奠定了初步基礎。
　　研究目的：
　　檢測TET蛋白家族在胃癌及癌旁組織中的表達情況，分析其表達與分化程度、TNM分期、有無淋巴結轉移等胃癌臨床病理特征的關系，以及胃癌組織TET表達水平與患者預后的相關性。進一步檢測胃癌組織E-鈣黏蛋白(E-cadherin)

5、表達量，分析TET2與E-cad表達水平的相關性，探討TET2是否與胃癌轉移相關，為胃癌的分子靶向治療和預后評估提供新的思路。
　　研究方法：
　　實驗分組:胃癌組織及胃癌癌旁組織兩組。
　　實驗步驟: HE染色再次明確石蠟標本胃癌診斷后，腫瘤及部分癌旁區(qū)域制備組織芯片。運用免疫組化技術，檢測上述組織中TET蛋白家族和E-cad的表達情況，由兩位病理醫(yī)師根據免疫組化積分打分法(Immnohistochemical se

6、mi-quantitativeRemmele scoring system，IRS)對染色結果分別進行評分，即:免疫組化染色的評分同時考慮免疫反應染色強度(staining intensity，SI)和陽性細胞百分比(positive percent，PP)。SI分值:0分為未見陽性細胞，1分為細胞陽性染色最強處呈現(xiàn)弱陽性，2分為陽性，3分為可見強陽性染色的細胞;PP分為5級:0分為無染色陽性區(qū)域，1分為陽性染色區(qū)域≤10％，2分為陽性

7、區(qū)域介于11％～50％，3分51％～80％，當陽性染色區(qū)域＞80％時為4分。IHC得分=SI×PP。最后按得分將結果區(qū)分為高表達與低表達兩組:低表達即0≤積分≤4分，評分＞4分為高表達。
　　對本組胃癌患者進行術后隨訪，獲取患者基本資料、相關臨床治療方案及預后信息。分析TET蛋白家族、E-cad表達量與胃癌患者臨床病理參數(shù)及預后的關系，探討TET2與E-cad表達的相關性。
　　研究結果：
　　1.獲取胃癌癌旁組織29

8、例及胃癌組織100例。免疫組化檢測TET蛋白家族表達情況，發(fā)現(xiàn)TET蛋白家族在胃癌中的表達相較于癌旁組織表達下降（均P＜0.05）。
　　2.TET1蛋白表達與胃癌分化、TNM分期有關（均P＜0.05）;TET2表達與腫瘤的直徑、分化程度、淋巴結轉移、TNM分期有關(p＜0.05);TET3在胃癌組織中的表達僅與患者是否存在淋巴結轉移有關(P＜0.05)。
　　3.TET1和TET3蛋白在胃癌組織中的表達與胃癌患者預后無關（

9、均P＞0.05）;TET2蛋白的表達與胃癌預后相關(P＜0.05)，TET2高表達的患者總生存期長于TET2低表達(P＜0.05)。
　　4.相較于胃癌癌旁組織，E-cad在胃癌中的表達下降，其表達與胃癌分化、淋巴結轉移、TNM分期有關(p＜0.05)。
　　5.分析TET2、E-cad與無轉移生存時間的關系，TET2蛋白、E-cad低表達患者無轉移生存時間短于其高表達的患者。其差異具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。

10、　　6.胃癌組織中TET2與E-cad表達呈顯著的正相關性(p＜0.01)。TET2高表達的病例中，有65.4％的組織E-cad也呈高表達;TET2低表達的病例中，有90.5％的患者E-cad低表達。
　　研究結論：
　　1、相較于胃癌癌旁組織，TET蛋白家族在胃癌組織中表達降低，Tet的表達與胃癌臨床病理特征密切相關，提示TET蛋白家族參與胃癌演進;
　　2、TET2在胃癌中高表達患者的生存率高于低表達患者，提示Te