TMPRSS4表達(dá)調(diào)控與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究.pdf

1、背景：胃癌(gastric cancer，GC)是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。2007年全球新發(fā)胃癌數(shù)1，000，000例，僅次于肺癌、乳腺癌和大腸癌，位居第4位，全球因胃癌死亡800，000例，位居癌癥死因的第2位。盡管近年來(lái)外科手術(shù)、化療、放療、免疫治療等治療手段取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但由于缺乏特異性臨床表現(xiàn)及有效的早期診斷技術(shù)，在接受治療的病人中很大一部分是進(jìn)展期患者，而世界范圍內(nèi)進(jìn)展期胃癌5年生存率仍不足25％。腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移既是胃

2、癌患者死亡的主要原因，也是影響臨床療效和預(yù)后的關(guān)鍵因素。研究胃癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制，了解胃癌進(jìn)展過(guò)程中可能的分子步驟具有十分重要的意義。
　　 Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶(TypeⅡ transmembrane serine larotease，TTSPs)是一大類(lèi)位于細(xì)胞膜上的蛋白水解酶，在上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、腫瘤信號(hào)傳遞中起著重要作用?？缒そz氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)是TTSPs家族中的一員，近年來(lái)的

3、研究發(fā)現(xiàn)在胰腺癌中表達(dá)增高，功能上具有胰酶活性，可能在腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲過(guò)程中起到重要作用。但TMPRSS4對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。
　　 目的：通過(guò)檢測(cè)TMPRSS4在臨床胃癌病例及胃癌細(xì)胞系中表達(dá)情況，分析TMPRSS4表達(dá)與胃癌臨床病理因素、臨床預(yù)后和胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。進(jìn)一步通過(guò)質(zhì)粒構(gòu)建轉(zhuǎn)染技術(shù)抑制TMPRSS4的表達(dá)及恢復(fù)其表達(dá)，研究TMPRSS4調(diào)控GC侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。探討TMPRSS4表達(dá)在胃

4、癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用及意義。
　　 方法：
　　 1.采用qRT-PCR和Western blot方法檢測(cè)35例新鮮胃癌組織和鄰近非癌胃組織中TMPRSS4 mRNA和蛋白的表達(dá)情況，分析TMPRSS4 mRNA和蛋白與胃癌臨床病理因素的關(guān)系。
　　 2.采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)108例胃癌組織和108例鄰近非癌胃粘膜組織中TMPRSS4蛋白的表達(dá)情況，分析胃癌組織中TMPRSS4的表達(dá)與胃癌臨床病理因素及患者預(yù)

5、后之間的關(guān)系。
　　 3.采用qRT-PCR和Western blot方法檢測(cè)在AGS，BGC-27，BGC-823SGC-7901和MGC-803胃癌細(xì)胞系中TMYRSS4mRNA和蛋白的表達(dá)情況。
　　 4.構(gòu)建特異性TMPRSS4 siRNA表達(dá)載體，使用脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)TMPRSS4的胃癌細(xì)胞系，經(jīng)G418篩選，獲得穩(wěn)定TMPRSS4表達(dá)抑制的胃癌細(xì)胞系。通過(guò)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、同質(zhì)性及

6、異質(zhì)性粘附實(shí)驗(yàn)、生長(zhǎng)曲線、克隆形成等方法研究TMPRSS4表達(dá)抑制調(diào)控GC侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。
　　 5.構(gòu)建TMPRSS4過(guò)表達(dá)載體，使用脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染TMPRSS4表達(dá)抑制的胃癌細(xì)胞，恢復(fù)TMPRSS4表達(dá)，通過(guò)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、同質(zhì)性及異質(zhì)性粘附實(shí)驗(yàn)、生長(zhǎng)曲線、克隆形成等方法研究TMPRSS4過(guò)表達(dá)調(diào)控GC侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1.與鄰近非癌胃粘膜組織相比，胃癌組

7、織中TMPRSS4的陽(yáng)性表達(dá)率明顯增多(P<0.01)；胃癌組織中TMPRSS4蛋白表達(dá)強(qiáng)弱與胃癌癌灶的大小、浸潤(rùn)深度、腫瘤TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目有關(guān)(P<0.05)；單因素分析顯示TMPRSS4蛋白強(qiáng)表達(dá)組5年生存率低于弱表達(dá)組(P<0.001)；Cox多因素分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)TMPRSS4蛋白表達(dá)情況也是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素。
　　 2.成功構(gòu)建了TMPRSS4 siRNA表達(dá)載體和TMPRSS4過(guò)表達(dá)載體并且能高效轉(zhuǎn)入M

8、GC-803細(xì)胞內(nèi)。與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組比較，TMPRSS4 siRNA組中TMPRSS4 mRNA和蛋白表達(dá)沉默效率分別達(dá)到了68.77％和73.26％(P<0.001)；TMPRSS4過(guò)表達(dá)組中TMPRSS4 mRNA和蛋白表達(dá)明顯高于陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組(P<0.01)；與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，TMPRSS4 siRNA組中細(xì)胞的遷移和侵襲能力下降(P<0.01)；TMPRSS4過(guò)表達(dá)組中細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)(P<

9、0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.胃癌組織中TMPRSS4的高表達(dá)不僅與胃癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，也可作為判斷胃癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一。
　　 2.TMPRSS4 siRNA表達(dá)載體能有效地抑制胃癌MGC-803細(xì)胞TMPRSS4 mRNA及蛋白的表達(dá)。沉默TMPRSS4在胃癌MGC-803細(xì)胞中的表達(dá)可抑制MGC-803細(xì)胞遷移和侵襲，增強(qiáng)胃癌MGC-803細(xì)胞的同質(zhì)性粘附，下調(diào)FAK、ERK、磷酸化Akt和