新型磷酸酶MTMR14對哮喘和心肌肥厚的影響.pdf

1、MTMR14是一種新型磷酸酶，它最特異的生物學底物是磷酸肌醇而不是蛋白質。MTMR14在骨骼肌、睪丸、氣管平滑肌和心臟中高表達，該基因的缺失將導致一系列疾病，如中央核肌病、骨骼肌細胞衰老、動脈粥樣硬化，肌肉疲勞和肌無力等。然而，MTMR14在哮喘和心肌肥厚中的作用尚不清楚。
　　本研究分為兩個部分：第一部分：MTMR14對哮喘的影響。我們用雞卵清白蛋白(OVA)致敏小鼠，以建立21天急性哮喘模型，并對其進行評價。結果顯示：與對照組

2、小鼠相比，哮喘小鼠發(fā)生氣道炎癥和氣道重塑。Real-time PCR實驗結果顯示：MTMR14在哮喘小鼠的氣管平滑肌（ASM），支氣管平滑?。˙SM）和肺（Lung）中下調表達。進一步免疫組化結果顯示：MTMR14在哮喘小鼠的氣管中下調表達。全細胞內鈣檢測結果顯示：MTMR14的缺失導致氣管平滑肌細胞內鈣增加。值得一提的是，我們用全細胞膜片鉗技術在 MTMR14野生型（MTMR14 WT）小鼠的氣管平滑肌細胞中檢測到了L-型鈣電流（VD

3、LCC），而在MTMR14基因敲除型（MTMR14 KO）小鼠的氣管平滑肌細胞中卻沒有檢測到VDLCC電流。這一部分實驗結果提示：MTMR14的缺失可能導致哮喘。第二部分：MTMR14對心肌肥厚的影響。我們成功從乳鼠心臟分離出原代心肌細胞。免疫熒光實驗顯示：原代培養(yǎng)的心肌細胞純度很高，接近100％。Real-time PCR實驗結果顯示：Ang II處理原代心肌細胞48 h后，ANP, BNP和β-MHC均上調表達，表明心肌肥厚模型建立

4、成功。接著，我們以 H9C2心肌細胞系作為實驗對象。在mRNA水平，我們通過RT-PCR技術，檢測MTMR14在H9C2中表達情況；在蛋白水平，通過免疫熒光實驗證明MTMR14在H9C2中表達。Ang II處理H9C2細胞48 h后，Real-time PCR實驗結果顯示：ANP, BNP和β-MHC均上調表達；免疫熒光實驗結果顯示：心肌細胞表面積增大，表明心肌肥厚模型建立成功。全細胞膜片鉗技術顯示：肥厚的H9C2細胞中，VDLCC電流