普通肝素通過減少HOXA9表達下調(diào)抑制內(nèi)皮細胞活化.pdf

1、目的：
　　內(nèi)皮細胞活化在許多血管病理過程中起主要作用，如炎癥和動脈粥樣硬化。內(nèi)皮細胞活化導致內(nèi)皮細胞上的白細胞粘附分子如細胞間粘附分子-1（ICAM-1），血管粘附分子-1(VCAM-1)，E-選擇素表達增加。白細胞粘附分子對循環(huán)中的白細胞向炎癥組織聚集和轉(zhuǎn)移起重要作用。一些研究表明某些炎癥因子和其他生化物質(zhì)如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，佛波酯(PMA)，脂多糖(LPS)，白細胞介素-1β(IL-1β)上調(diào)ICAM-1，VA

2、CM-1，E-選擇素表達，而IL-4，IL-10則下調(diào)這些分子的表達。HOXA9是一種同源異型盒基因，有研究表明可能是維持內(nèi)皮細胞穩(wěn)態(tài)的必要條件，HOXA9表達減少是炎癥因子刺激內(nèi)皮細胞活化的先決條件，HOXA9過表達可引起NF-κB活性下調(diào)，從而抑制炎癥因子刺激下白細胞粘附分子的表達。許多臨床研究和實驗發(fā)現(xiàn)肝素通過抑制NF-κB的活性抑制炎癥反應(yīng)，同時也有研究證實應(yīng)用肝素可以抑制LPS刺激下內(nèi)皮細胞粘附分子E-選擇素、ICAM-1的表

3、達的作用，但普通肝素(UFH)是否通過影響HOXA9表達從而通過NF-κB通路影響內(nèi)皮細胞活化的機制尚不清楚。本實驗研究旨在探討UFH對LPS誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)活化時HOXA9表達以及內(nèi)皮細胞活化的影響。
　　方法：
　　HUVECs細胞株傳代培養(yǎng)后隨機分4組(n=5)，施以相應(yīng)處理因素:①對照組（加入等量PBS）;②LPS組(LPS10μg/ml);③UFH組(UFH10U/ml);④UFH+LPS組(U

4、FH10U/ml+LPS10μg/ml)，UFH10U/ml30min后加入LPS10μg/ml。繼續(xù)在孵箱中孵育3h后收集各組細胞。用細胞核蛋白抽提試劑提取核蛋白，western blot檢測HUVECs中NF-κB的表達。提取總蛋白，western blot檢測HUVECs中E-選擇素、HOXA9的表達。
　　結(jié)果：
　　用Western blot方法檢測HUVECs各組細胞的E-選擇素、HOXA9、NF-κB的蛋白表達

5、情況并行相對灰度值檢測。對照組和肝素組HUVECs僅有少量E-選擇素表達，LPS組E-選擇素表達明顯增加（相對灰度值0.113±0.055），UFH+LPS組E-選擇素表達下降（0.057±0.017），二者之間有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。LPS使HOXA9表達明顯下降（相比于對照組和肝素組），UFH+LPS組HUVECs表達HOXA9增加（與LPS相比）。HUVECs在LPS組表達NF-κB增加（相對灰度值0.845±0.025），