三羥異黃酮對脂質(zhì)代謝調(diào)控的研究.pdf

1、肝臟是脂類代謝的主要器官和重要場所，脂肪肝是常見的肝臟疾病之一，形成原因主要是肝細胞內(nèi)脂肪儲積積累過多、細胞脂肪化嚴重，導致脂肪代謝發(fā)生紊亂形成。有人已經(jīng)檢測出大豆異黃酮對實驗性大鼠脂肪肝有顯著的治療作用。大豆基異黃酮是從豆科植物根部分離得到的一種天然次級代謝產(chǎn)物，它具有顯著的抗癌、抑菌、抗氧化等作用。三羥異黃酮(Genistein，Gen)在大豆異黃酮活性功能中發(fā)揮重要作用，研究發(fā)現(xiàn)三羥異黃酮在脂質(zhì)代謝過程中主要通過PPARs過氧化物

2、酶體增殖物激活受體調(diào)控以及對代謝酶的表達與活性的調(diào)控發(fā)揮重要生理功能。
　　目的:本文主要通過細胞體外培養(yǎng)試驗來探索三羥異黃酮調(diào)控脂質(zhì)代謝的途徑，研究Gen對過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)、肝X受體(LXR)、脂肪甘油三酯脂酶(Adipose Triglyceride lipase，ATGL)、激素敏感性甘油三酯脂肪酶(Hormone-sensitive lipase，HSL)調(diào)控表達中的規(guī)律，比較三羥異黃酮與PPAR激

3、動劑對細胞活性的影響，以及探究Gen對脂肪化細胞中人腫瘤壞死因子TNF-α、瘦素Leptin的調(diào)控規(guī)律，為三羥異黃酮在營養(yǎng)保健、臨床藥理、調(diào)脂保肝等方面提供理論基礎和試驗依據(jù)。
　　方法:實驗對象為體外培養(yǎng)細胞模型，培養(yǎng)人體正常肝細胞L-02、人肝癌細胞HepG2、Hep3b以及小鼠前脂肪細胞3T3-L1四種細胞，將細胞分為空白組、模型組、Gen試劑組以及PPAR激動劑組。首先用MTT測定細胞在不同油酸(OA)濃度下的細胞活性，確

4、定最佳的OA誘導濃度，建立細胞脂肪化模型。用AnnexinⅤ/PI雙染色法對細胞進行染色處理，流式細胞儀檢測細胞的凋亡情況;進一步驗證Gen與PPAR激動劑及抑制劑比較對細胞的毒性影響;利用Gen、PPAR激活劑及抑制劑處理四種脂肪化細胞，實時熒光定量PCR測定細胞內(nèi)ATGL、HSL、PPARα、PPARγ以及肝X受體LXR的mRNA表達量;酶聯(lián)免疫法檢測Gen、PPAR激活劑及抑制劑處理后的四種脂變細胞培養(yǎng)液中的TNF-α、Lepti

5、n含量變化。
　　結(jié)果:(1) MTT細胞活力測定實驗中，當油酸濃度高于1mM時，細胞活力大幅度降低且部分細胞漂浮壞死，細胞內(nèi)TG含量顯著性累積，當油酸濃度低于1mM時，細胞活力相近，細胞形態(tài)變化不明顯。(2)流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，三羥異黃酮對細胞脂肪化有保護作用，能提高細胞的活性。(3) Gen可以上調(diào)PPARs以及LXRα的mRNA表達量，其中對PPARs調(diào)控較LXRα顯著，同時細胞中HSL和ATGL的mRNA表達量也有相應

6、的提高。(4) Gen可以呈劑量效應調(diào)控TNF-α、Leptin濃度。
　　結(jié)論:使用1mM濃度的OA誘導建立細胞脂肪化模型較為適宜，Gen與PPAR激動劑都能調(diào)節(jié)細胞的脂質(zhì)代謝活性，調(diào)控細胞的TG含量。Gen可以通過代謝性核受體途徑調(diào)節(jié)ATGL、HSL的活性，TNF-α、Leptin能夠明顯降低ATGLmRNA的表達，Gen是通過調(diào)控PPARs途徑來抑制TNF-α、Leptin分泌，調(diào)控體內(nèi)脂質(zhì)代謝產(chǎn)生降脂效果，具有重要的生理意