三羥異黃酮調控肝臟UGTs活性機理研究.pdf

1、目的：三羥基異黃酮（Gen）是一種廣泛存在于大豆等豆科植物中的次級代謝產(chǎn)物，研究發(fā)現(xiàn)其具有抗癌、抗氧化等多種生物學功能。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶(UGTs)是一類存在于動物肝臟中的重要的Ⅱ相代謝酶，能夠催化肝臟代謝解毒作用，本文研究了Gen通過誘導肝臟UGTs酶活從而促進肝臟解毒效果的作用及其作用機理。
　　方法：利用對乙酰氨基酚（APAP）誘導肝損傷小鼠模型進行三羥基異黃酮肝臟保護實驗，通過檢測小鼠肝臟丙二醛（MDA）含量、肝

2、臟總抗氧化能力（T-AOC）、血清谷氨酸氨基轉移酶活(ALT)、肝臟谷胱甘肽過氧化物酶活(GSH-Px)、肝臟與血清中的谷胱甘肽(GSH)含量等生化指標對Gen對APAP誘導小鼠肝損傷的保護作用進行評價；利用經(jīng)過Gen處理后的小鼠肝臟制備微粒體并進行體外孵育實驗，以4-MU為底物檢測微粒體中UGTs酶的活性，并進一步進行了APAP在體外微粒體孵育反應中的酶促轉化檢測；人體細胞實驗利用MTT法檢測了APAP對受不同濃度Gen保護的人肝癌細

3、胞HepG2、Hep3b以及人正常肝細胞L-02的活性影響；利用實時熒光定量PCR檢測Gen對三種細胞中UGTs同工酶UGT1A1、UGT1A6、UGT1A9及核轉錄相關因子（Nrf2）和Kelch樣ECH聯(lián)合蛋白1（Keap1）的mRNA的表達的影響，進一步探討Gen誘導UGTs活性表達以及作用機理。
　　結果：（1）與模型組比較，Gen誘導后的實驗組小鼠肝臟MDA水平、血清ALT水平顯著降低，肝臟T-AOC、肝臟GSH-Px活

4、性顯著增高，且表現(xiàn)有劑量依賴效應；Gen誘導組小鼠的肝臟及血清中GSH恢復速度高于模型組，24h后高、中劑量組的肝臟及血清GSH能恢復到對照正常水平；（2）Gen可以上調肝臟中UGTs的活性，并且能夠提高APAP在體外孵育反應中的代謝轉化率；（3）Gen能提高細胞對APAP毒性的抵抗能力，減輕APAP對細胞的損傷作用；Gen顯示出上調UGT1A1、UGT1A6、UGT1A9及Nrf2的mRNA的表達量，下調Keap1表達的作用。