布魯氏菌競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法建立及應(yīng)用.pdf

1、目的：目前我國(guó)尚無基于脂多糖（LPS）抗原的，商業(yè)化的布魯氏菌競(jìng)爭(zhēng)ELISA（CELISA）試劑盒，用于臨床血清學(xué)診斷的CELISA多為國(guó)外試劑盒，因成本高，而不利于基層推廣。為此，建立擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的，基于LPS的CELISA試劑盒顯得尤為重要。我們目的是，以LPS為抗原，建立快速、敏感、特異的CELISA免疫診斷試劑盒。
　　方法：采用改良的熱酚水法提取羊種布魯氏菌16M SLPS抗原，并對(duì)所提取SLPS抗原活性等進(jìn)行鑒定，

2、經(jīng)鑒定合格的SLPS抗原，用于單克隆抗體的制備與試劑盒包被抗原。同時(shí)，對(duì)單抗快速篩選方法進(jìn)行摸索，經(jīng)過交叉篩選，半固體培養(yǎng)法篩選，篩選能與羊種布魯氏菌16M、牛種布魯氏菌544、豬種布魯氏菌S2反應(yīng)，而不與大腸桿菌O157、耶爾森菌O9產(chǎn)生交叉反應(yīng)的單抗。并基于該單抗，建立CELISA試劑盒，對(duì)所建立的CELISA試劑盒進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)，如敏感性、特異性、符合率、重復(fù)率等。
　　結(jié)果：⑴經(jīng)改良的熱酚水法提取，得到高純度、高抗原活性的

3、羊種布魯氏菌16M LPS抗原，并對(duì)其經(jīng)行標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)，所提取的LPS可用于試劑盒的研發(fā)；⑵經(jīng)過交叉篩選方案，得到了五株高特異性、高親和力的IgG亞類單抗，并選擇效果最優(yōu)的一株，6-7D4進(jìn)行方法建立；⑶采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)篩選法對(duì)單抗進(jìn)行篩選，提高了得到單抗的幾率，同時(shí)又縮短了特異性單抗篩選所需的時(shí)間；⑷基于布魯氏菌16M SLPS抗原與抗16M LPS特異性單抗6-7D4，初步建立了CELISA免疫診斷試劑盒；⑸用所建立的CELI